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细胞培养操作规程:
Cas9稳定表达的人卵巢腺癌细胞;SK-OV-3-Cas9-562厂家主要功能:
(1)血管平滑肌细胞的再生能力是原发血管病变的重要因素。
(2)表达钙通道及ICAM-1和VCAM-1,参与血管壁的炎症反应。
(3)与血管疾病的进展和稳定有关。
生理变化:
(1)主动脉硬化。
(2)主动脉瘤
(3)主动脉钙化。
一般培养方法:
1、组织块培养法
A)按照前述方法取材,将组织剪成或切成1mm3大小的小块,并加入少许培养基使组织湿润。
B)将小块均匀涂布于瓶壁,每小块间距0.2 cm~12.5px,一般在25mL培养瓶(底面积为437.5px2)可接种20~30小块为宜,小块放置后,轻轻翻转培养瓶,使瓶底朝上,然后于瓶内加入适量培养基盖好瓶塞,将瓶倾斜放置在37℃温箱内。
C)培养2~4小时,待小块贴附后,将培养瓶缓慢翻转平放,静置培养,动作要轻,严禁摇动和来回振荡,以防由于冲动而使小块漂起而造成培养失败,若组织块 不易贴壁可预先在瓶壁涂一薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。开始培养时培养基不宜多,以保持组织块湿润即可,培养24小时后再补液,培养初期移动和观察时要轻 拿轻放,开始几天尽量不去搬动,以利贴壁和生长,培养3~5天时可换液,一方面补充营养,一方面去除代谢产物和漂浮小块所产生的毒性作用。
2、消化培养法
该方法是采用前述的消化分散法,将妨碍细胞生长的细胞间质(包括基质、纤维等)去除,使细胞分散形成细胞悬液,然后分瓶培养。
3、悬浮细胞培养法
对于悬浮生长的细胞,如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化,可采用低速离心分离,直接培养,或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。
细胞名称 Cas9稳定表达的人卵巢腺癌细胞;SK-OV-3-Cas9-562
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞是采用慢病毒感染的方式使SK-OV-3细胞稳定表达Cas9-Flag-Neo,经400ug/mlG418筛选得到的单克隆,经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白,可直接用Crispr技术编辑基因组DNA。
培养条件 McCoy's 5A Media (Modified with Tricine) 10%FBS;400ug/ml G418
传代方法 1:2~1:6传代;每周2~3次。
传代情况 C3
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
产品名称 | Cas9稳定表达的人卵巢腺癌细胞;SK-OV-3-Cas9-562厂家 |
生长特性 | 贴壁生长 |
货号 | CS-X6671 |
Cas9稳定表达的人卵巢腺癌细胞;SK-OV-3-Cas9-562厂家运输保存:采用干冰保存运输。收到细胞时,若干冰已经完全融化,请立即将细胞复苏培养;
若尚留有干冰,请立即将细胞放入液氮中保存待用,请按指定条件贮存细胞,切不可将细胞置于高温环境。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取
ICAM1 英文名称: 细胞间粘附分子-1抗体 0.1ml
Anti-GAPDH 3-磷酸甘油醛脱氢酶(兔来源免疫组化用抗体)Multi-class antibodies规格: 0.1ml
MCV(Human anti-mutated citrullinated vimentin antibody) ELISA Kit 人抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-phospho-IKK alpha (Ser176 + Ser180) 磷酸化KB抑制蛋白激酶α抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MAGEA5 黑色素瘤相关抗原5抗体 规格 0.2ml
Lp-PL-A2(Human lipoprotein-associated phospholipase A2) ELISA Kit 人脂蛋白磷脂酶A2 96T
RNF185 英文名称: 环指蛋白185抗体 0.2ml
Cas9稳定表达的人卵巢腺癌细胞;SK-OV-3-Cas9-562厂家Rhesus antibody Rh Phospho-CDK9 (Thr29) 磷酸化周期素依赖性激酶9抗体 规格 0.1ml
猪IgG干粉 10mg/50mg/100mg 国产
WFDC5 英文名称: P53应答基因蛋白5抗体 0.2ml
DLG5 英文名称: 胎盘和前列腺相关蛋白DLG5抗体 0.1ml
Anti-ACTH (1-39) 促肾上腺皮质激素(1-39)抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml
Exportin 1/CRM1 英文名称: 染色体区域稳定蛋白/核输出蛋白1抗体 0.1ml
ZCWCC1抗体 Anti-ZCWCC1 0.2ml
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