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核酸内切酶IV
核酸内切酶IV ,又叫Nfo,来源于E.coli,参与DNA损伤修复。该酶可识别双链DNA分子上的脱嘌呤/脱嘧啶(AP)位点,并切割 AP 位点 5′ 端的一个磷酸二酯键,产生3′羟基和5′脱氧核糖磷酸末端;另外,核酸内切酶IV还具有3′二酯酶活性,能从 DNA 的 3′末端释放磷酸甘油醛、完整的脱氧核糖 5′-磷酸和磷酸该酶还具有3′-5′的外切酶活性,该酶对底物的渐进式作用受到金属离子、DTT、EDTA等的影响,且更倾向于作用于3′凹末端的双链DNA。 | |
组分 | |
名称数量Endonuclease IV (10 U/μl)100 μl/500 μl10X Endonuclease IV Buffer1 ml/1 ml×5 | |
应用 | |
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单位定义 | |
在1×Endonuclease IV Buffer (100 mM NaCl,50 mM Tris-HCl(pH 7.9),10 mM MgCl2,1 mM DTT)中,10μl反应体系内, 37°C反应1h,能切割 1 pmol 含一个 AP 位点的 34 mer 寡核苷酸双链所需要的酶量定义为一个活性单位。 | |
酶储存液 | |
50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 50% Glycerol. | |
热失活 | |
85°C 20min。 | |
储存 | |
置于-20°C可保存2年,避免反复冻融。 |