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热敏型双链DNA特异性核酸酶(HL dsDNase)
热敏双链DNA特异性核酸酶(Heat labile ds-DNA-specific Nuclease,又名ezDNase或HL dsDNase),为双链特异性核酸酶。其特异性的识别降解双链DNA,对单链DNA或RNA几乎无活性,其降解dsDNA的能力比ssDNA高~5000倍。除此外,该双链DNA特异性核酸酶降解双链DNA的能力比bovine DNaseI高~30倍,因此特别适用于去除RNA样品中的基因组DNA污染。该热敏型双链DNA核酸酶可将DNA降解为2~8bp的产物,且55℃ 5min可使该酶不可逆失活,同时又能保持RNA和ssDNA的稳定性,因此产物无需再纯化,可直接用于后续反应。同时该酶与M-MLV和AMV的反应Buffer都是兼容的,可应用于反转录反应中去除样本中基因组DNA的污染,提高反转录效率。 | |
单位定义 | |
1单位指在25℃标准反应条件下,每分钟OD260增加0.001(约每分钟消化1pmol核酸底物)所需的酶量。 | |
组分 | |
名称数量HL dsDNase (2 U/μl)50 μl/500 μl10×dsDNase Buffer1 ml /2 ml | |
储存 | |
置于-20°C,可保存3年。 | |
使用注意事项 | |
((1)1×dsDNase Buffer:20mM Tris-HCl pH8, 2mM MgCl2。该酶需要1~3mM MgCl2。 (2)该酶对DTT敏感,任何反应体系中不得包含DTT。 (3)通常在RT反应中的用量为0.1~0.5U/20 μl体系。 (4)任何浓度的SDS、盐酸胍、β-mercaptoethanol或高盐离子(>300mM)均抑制该酶活性。 (5)该酶的佳反应温度为25~37℃,42℃ 30min后活性损失70%。 | |
实例 | |
![]() | |
取人基因组2.5 μg,分别用0、0.125、0.25、0.5、1 μl的热敏双链DNA特异性核酸酶37℃消化15min,如图所示。 |