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获取电话超稳定BL21（DE3）感受态细胞
| 超稳定BL21（DE3）感受态细胞使用联迈生物独有的化学感受态专利技术制备，其室温可保存1个月、-20°C可保存2年（推荐保存温度）、-80°C可长期保存性能无下降。运输过程中无需干冰，可室温运输、可常规冰袋运输（推荐运输温度）。本BL21(DE3)感受态细胞为热激感受态细胞，转用于蛋白表达（不可用于克隆和载体构建），经42°C热激1min可获得105～106cfu/μg效价，可满足质粒转化要求。该制品使用简单、运输、储存方便。 | ||
组分 | ||
| 组分名称数量RTS BL21(DE3) Competent Cell10支Nano E.coli Transfection Reagent600μl | ||
储存 | ||
| -20°C可保存半年，-70度可保存2年；可室温运输。 | ||
使用方法 | ||
| 1. 从-20°C冰箱中取出Nano E.coli Transfection Reagent彻底融化，放置于冰上。注意：该试剂含长链带电化合物，允许反复冻融20次，使用完毕后继续-20°C保存。 2.取50 μl Nano E.coli Transfection Reagent置于0.2ml EP管中，加入1～20ng质粒DNA（不可使用连接产物），枪头吹打混合均匀，冰上放置2～5min。注意：放置时间不要超过30min，过长时间会导致核酸聚合，从而影响转化效价。 3. 将上述混合物（50μl Nano E.coli Transfection Reagent和质粒DNA）加入到一支RTS BL21(DE3)感受态细胞干粉中，枪头轻轻吹打，彻底溶解细胞干粉，置于冰上15min。注意：使用RTS BL21(DE3)感受态细胞干粉前，轻甩干粉至管底部，如果发现干粉已经溶解则不可使用。 4. 置于42°C热激1min后，迅速置于冰上急冷2min。 5. 向热激完毕的感受态细胞中，加入450 μl 不含抗生素的SOC（或LB）培养基，37°C振荡（225 rpm）培养60min。使质粒上抗性标记基因表达，菌体复苏。 6. 取200μl复苏菌液涂布到含相应抗生素的LB琼脂平板表面。 7. 将平板置于37°C培养，12~18小时后可出现菌落。 8. 获得的表达菌，可使用IPTG进行诱导表达，从而获得重组蛋白。 |
