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Benzonase核酸酶
Benzonase核酸酶,是一种核酸内切酶,可将核酸降解成2~5个碱基的5‘单磷酸核苷酸,因其能高效降解任何形式(双链,单链,线状,环状)的DNA和RNA而没有蛋白裂解活性,又被称为“全能核酸酶”。Benzonase核酸酶能有效降低蛋白样品粘度,去除蛋白样品中核酸的污染,且无蛋白酶活性残留,核酸酶活性达1×106 U/mg蛋白。Benzonase核酸酶在降低粘性的同时, 也具有多种其他用途,如:减少了样品处理时间,增加了蛋白产量,离心时时沉淀和上清分离的更彻底,更便于溶液的离心(尤其是超滤);提高色谱纯化的效率等。 本公司Benzonase核酸酶包括四种,分别为不含任何标签的Benzonase核酸酶(科研级别)、无内毒素Benzonase核酸酶、Strep tagII Benzonase核酸酶(科研级别)和无内毒素的Strep tagII Benzonase核酸酶,可适应不同下游用途的需求。其中Strep tagII Benzonase核酸酶可在消化完核酸后通过Strep Tactin XT Resin高效去除,而无内毒素的两种Benzonase核酸酶,内毒素含量<40EU/mL(按照单位换算量计算为,每1000U中含有的内毒素<0.15EU),可适用于药用级别的研发和生产。另外,核酸酶残留可通过我公司开发的基于 荧光探针的Benzonase核酸酶残留检测试剂盒进行评测,15min即可完成检测,低可检测到2ng/ml的核酸酶残留。 | |
用量推荐 | |
实验类型电泳蛋白样品制备非药物蛋白生产药物蛋白生产疫苗、病毒生产细胞药物推荐产品Benzonase(科研级)Benzonase(科研级)Strep-tagII Benzonase(科研级)Benzonase(无内毒素级)Strep-tagII Benzonase(无内毒素级)细胞数量1X106个细胞(10mg组织)1g湿重 (重悬液10mL)1L 发酵上清液1L 培养物低用量125U (0.5 μL)25U/mL(1 μL)25U/mL(1 μL)0.1U/mL(0.4 μL)0.1U/mL(0.4 μL)推荐用量500U (2 μL)250U/mL(10 μL)250U/mL(10 μL)25U/mL(100 μL)5U/mL(20 μL)作用时间通常作用时间37℃在15~60min;25℃在30~120min; | |
单位定义 | |
37℃,pH 8.0反应条件下,在30分钟内使△A260 值降低1.0(相当于完全消化37 μg DNA )的酶量定义为一个活性单位。 注意:含大量蛋白、细胞壁、其它盐分的粗制品,对该酶活性有部分抑制作用,使用时需要增加酶的用量。 | |
应用 | |
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储存 | |
置于-20°C,可保存2年。 | |
实例分析 | |
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Fig1. 分别取不同量(0、0.125、0.25、0.5、1、5、10U)的Benzonase核酸酶消化人基因组DNA10min,进行琼脂糖电泳。 | Fig2. A为未加Benzonase处理的,B为加Benzonase处理的 样品进行二维电泳。如图所示,Benzonase处理的样品可显 著增加二维电泳的分辨率。 |
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Fig3.经RIPA裂解未经Benzonase核酸酶处理的样品, 大量基因组DNA释放出来,呈鼻涕状。 | Fig4.离心后,左管为未加Bezonase核酸酶,有鼻涕状 粘稠物质悬浮在管中,右管为加Bezonase核酸酶,上 清为透明液体。 |
超强兼容性 | |
全能核酸酶在非常广泛的条件下,都能保持很高的稳定性和消化核酸的活性,这使其能够与多种细胞裂解液,如RIPA,或含有多种离子和非离子型去污剂、还原剂的蛋白提取试剂等兼容。例如:>100mM的盐酸胍会完全抑制Benzonase活性,1mM的EDTA会部分抑制Benzonase活性,5mM的EDTA会使活性丧失90%,1mM的PMSF则不会抑制核酸酶活性。 浓度<0.4%的Triton® X-100对核酸酶活性几乎无影响,<0.4%的脱氧胆酸钠使核酸酶可保持70%的活性,超过该临界值之后核酸酶活性会急剧降低,1%的浓度会使活性丧失70%;0.05%的SDS对核酸酶活性几乎无影响,而SDS浓度在0.1%-1%之间时,核酸酶在变性后活性会急剧降低,可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。另外,核酸酶可耐受6M尿素,当尿素达到7M时,核酸酶在变性后活性会急剧降低,亦可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。条件参数最适条件可作用条件范围Mg2+1-2mM1-10mMpH8.0–9.26–10温度37°C0–42°CDTT0–100mM>100mMβ-Mercaptoethanol0–100mM>100mM一价阳离子浓度(如Na+,K+)0–20mM0–150mMPO43-0–10 mM0–100mM | |
Benzonase的去除 | |
对于Strep-tag II标签的Benzonase核酸酶(C2003,C2004)可通过Strep Tactin XT Resin(联迈生物,C0402)直接 去除,去除率>95%;对于不带标签的Benzonase核酸酶(C2001,C2002),可通过色谱纯化去除核酸酶,然后可通过检测残留活性(联迈生物, C2005)或ELISA检测来判断去除是否成功。常见的色谱纯化方式有阳离子交换介质和阴离子交换介质,具体的Benzonase去除条件如下表:阴离子交换介质pH样品和平衡缓冲液Benzonase核酸酶TMAE7.050mM Tris/200mM NaClnot boundTMAE7.050mM Tris/50mM NaClnot boundTMAE8.050mM Tris/250mM NaClnot boundTMAE8.0>50mM Tris/100mM NaClnot boundTMAE9.0>50mM Tris/200mM NaClnot boundTMAE9.050mM Tris/100mM NaClnot boundDEAE7.050mM Tris/200mM NaClnot boundDEAE7.050mM Tris/50mM NaClnot boundDEAE8.050mM Tris/250mM NaClnot boundDEAE8.0>50mM Tris/100mM NaClnot boundDEAE9.0>50mM Tris/250mM NaClnot boundDEAE9.050mM Tris/50mM NaClnot boundDMAE8.0>50mM Tris/250mM NaClnot boundDMAE8.050mM Tris/50mM NaClnot bound阳离子交换介质pH样品和平衡缓冲液Benzonase核酸酶SO3-6.020mM phosphate/100mM NaClboundSO3-6.020mM phosphate/200mM NaClnot boundSO3-5.020mM acetate/200mM NaClboundSO3-5.0>20mM acetate/700mM NaClnot boundSO3-4.0>20mM acetate/300mM NaClboundSO3-4.020mM acetate/800mM NaClnot boundC00-6.020mM phosphate/0mM NaClnot boundC00-5.020mM acetate/40mM NaClboundC00-5.020mM acetate/100mM NaClnot boundC00-4.0>20mM acetate/150mM NaClpartially boundC00-4.020mM acetate/400mM NaClnot bound |