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冻干Fast DNA TaqMan PCR Reagent(UNG)
由于PCR对核酸的扩增效率极高,在诊断PCR实验中,非常容易造成移液器、台面、PCR仪、空气等气溶胶污染。当实验环境被污染后,会导致阴性样本的假阳性结果。本试剂中,将dNTP中的dTTP全部更换为dUTP,从而使得扩增后的PCR产物中包含dU碱基。在随后的实验中,含有气溶胶污染的dU PCR产物,将被本试剂中的UNG糖基化酶降解,从而去除了气溶胶的污染效应,本试剂中的UNG酶在37度孵育2分钟,即可消除高达10万个Copy的核酸污染物。因此,本制品是诊断定量PCR检测的佳试剂。 冻干Fast DNA TaqMan PCR Reagent(UNG)是采用TaqMan探针法进行Real-Time PCR的专用试剂,适合于FAM/HEX/TET/JOE等双标记探针(本品也适用于Molecular Beacon探针),其中冻干的TaqMan PCR Reagent将热启动Fast Taq DNA聚合酶、dNTP/dUTP、热敏UNG等做成冻干品试剂,制品性能稳定,可长期保存。当加入2×TaqMan Buffer溶解后,试剂变为常规TaqMan PCR单组分预混试剂,进行实验时,PCR反应液的配制十分方便简单,只需加入引物、探针、cDNA或DNA模板、水即可。该制品不含有ROX校正染料,适合各种荧光标记探针,并且适用于各种定量PCR机型。 制品中的Fast Taq DNA聚合酶采用专有的热启动技术确保55℃以下没有任何活性,因此可在室温建立反应体系。Fast Taq DNA聚合酶具有卓越的扩增速度,因此满足快速PCR程序,通常在30min以内可以完成扩增反应。同时该聚合酶具有耐受杂质的能力,同样适用于粗制核酸样本的扩增反应。 | ||
组分 | ||
名称200T×20μlLyophilized Fast DNA TaqMan PCR Reagent (UNG)2 瓶2×TaqMan PCR Buffer71ml×2 | ||
主要特征 | ||
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应用 | ||
基因检测和基因诊断试剂开发。 | ||
储存 | ||
1. Lyophilized Fast DNA TaqMan PCR Reagent(UNG)为干粉形态,每瓶可用于100次的扩增反应。 2. Lyophilized Fast DNA TaqMan PCR Reagent(UNG)为干粉形态,可置于室温保存12个月,-20℃长期保存,并可采用室温运输。 3. 冻干制品经2×TaqMan PCR Buffer5溶解后,可于-20℃长期保存。 | ||
反应实例 | ||
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Fig. 以pUC57质粒为模板,将该模板进行8个4倍稀释,第8个稀释梯度中模板拷贝数为10copy/μl,用Fast DNA TaqMan PCR Reagent(UNG)进行扩增检测,每个反应体系加模板2μl,如图所示,A:本制品在宽广的模板量区间内具有卓越的线性关系:扩增效率 97.5%,R2 =0.9995。 B:测试UNG去除DNA污染的能力,向反应体系中加入105copy的含dUTP的PCR产物,分别用普通冻干Fast DNA TaqMan PCR Reagent(B1)和Fast DNA TaqMan PCR Reagent(UNG)(B2)做定量PCR。从图中可以看出:UNG可很好的去除105copy 的气溶胶污染。C:图A扩增的标准曲线。 |