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| LAMP是一种新型核酸扩增技术，采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物，依赖于Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30~60分钟内DNA扩增可达109~1010倍。 LAMP检测方法分为多种，包括染料法、浊度法、电泳法以及我司新开发的TaqMan荧光探针法。我司推出基于LAMP常用检测方法的冻干LAMP检测通用试剂盒，该系列产品为冻干制品，相对于市面上的液体型产品更加稳定，灵敏度更高，操作更加方便，通常在30min内完成检测。 LAMP变色扩增试剂盒包括：冻干LAMP-HNB变色扩增试剂盒、冻干LAMP橙绿变色扩增试剂盒、冻干LAMP浊度扩增试剂盒和冻干LAMP-TaqMan扩增试剂盒。其中 羟基萘酚蓝（HNB）是一种金属离子指示剂，HNB与镁离子结合使得反应体系初始颜色为紫罗兰色，随着反应的进行，Mg2+与析出的焦磷酸根离子反应生成焦磷酸镁沉淀，羟基萘酚蓝失去了镁离子使得体系颜色变为天蓝色，而未反应的体系则仍保持着紫罗兰色 ；而橙绿变色染料（OG Dye）则可与LAMP扩增产物结合成明显的肉眼可见的荧光绿色，阴性反应则为橙色；浊度法则是由浊度仪检测或肉眼观察LAMP剧烈反应产生的焦磷酸镁沉淀而判断反应结果;而LAMP-TaqMan则是由荧光检测仪器实时分析反应而判读结果。 | ||
LAMP方法比较 | ||
| LAMP TaqManLAMP-橙绿变色LAMP-HNBLAMP-浊度变色现象荧光探针切割橙色变绿色紫罗兰色变天蓝色无色变白色浑浊检测设备定量PCR仪或恒温荧光检测仪肉眼可见肉眼可见肉眼可见或浊度仪区分度极易判读极易判读可以判读相对不明显灵敏度单Copy10Copy10-50Copy10-100拷贝特异性高特异比较特异一般一般反应温度60~63℃60~65℃60~65℃60~65℃反应时间15~25min20~40min20~40min20~40min反应用酶Bst5.0Bst4.0Bst4.0Bst4.0综合推荐★★★★★★★★★★★★★★★试剂开发难度较易较难非常难较难 | ||
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储存 | ||
| 所有制品为冻干形式，在未溶解前，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。使用LAMP Buffer溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存1个月，在-60℃以下长期保存。 | ||
实例 | ||
| 以检测非洲猪瘟病毒（ASFV）为例，以标准质粒为模板，分别用橙绿变色、HNB显色和浊度方法检测，结果如下图。
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| LAMP引物设计与实验指南 本公司免费为客户设计LAMP引物，需要设计引物者请来信咨询. | ||
注意事项 | ||
| (1). 为了减少交叉污染，请分区操作（试剂和模板DNA的配置操作好在不同区域中进行）。 (2). 实验时，所需模板量取决与样品类型（0.1 ng~100 ng），可先进行预实验确定模板量。 (3). 各区物品均为专用，不可交叉使用，防止污染。 (4). 实验过程中应穿工作服，带手套，建议使用带滤芯的一次性吸嘴。 | ||
