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农杆菌EHA105化学感受态细胞

农杆菌EHA105化学感受态细胞

价格: 680

品牌:LMAI Bio

供货周期: 现货

货号:LM-F376

规格:0.1mL*10

农杆菌EHA105化学感受态细胞

产品及特点本产品为 EHA105 农杆菌化学感受态细胞,为 C58 型背景,核基因中含有 筛选标签利福平抗性基因 rif。为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功 能的琥珀碱型 Ti 质粒 pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)。此质粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件,pEHA105 质粒自身的 T-DNA 转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体 T-DNA 顺利转移)。本产品适用于 水稻、烟草等植物的转基因操作,经 pCAMBIA2301 质粒检测转化效率高达 10E3cfu/μg。 
规格及成分 成分 编号 十孔盒包装
EHA105 农杆菌感受态细胞 140383 10×100 μL
使用手册 140383sc 1 份

运输及保存 干冰运输,-80℃保存,有效期一年。

自备试剂 质粒 DNA、液氮等

QQ图片20191121152700.png

使用方法 转化前准备

1. 冰水浴和 37℃水浴。

2. 液氮或干冰/乙醇混合物。

3. 将抗性平板在 28℃培养箱中平衡至少 15 分钟。

转化方法

1. 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化。

2. 无菌条件下,向刚刚融化的感受态细胞悬液中加入需要转化的质粒,每 100μL 感受态细胞加 1ug 质粒 DNA,轻柔混匀。冰水浴中静置 10 分钟。

3. 将离心管置于液氮中速冻 5 分钟(注:也可以用干冰和无水乙醇混合物替代液氮)。

4. 迅速将离心管置于 37℃水浴静置中 5 分钟,不要晃动水面。然后快速转至冰水浴中静置 5 分钟。

5. 加入 800 μL 无抗生素的 2×YT 或 LB 液体培养基,28-30℃振荡培养 2~3小时。使菌体复苏,表达抗性。

6. 5000rpm 离心 1 分钟收菌,保留 100 μL 左右上清,轻轻吹打重悬菌体,均匀涂布到含有相应抗生素的 LB 固体培养基平板上,待平板中的液体完全吸收后,倒置平板,28-30℃培养 48-72 小时。






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