找不到产品?留下需求帮您找
一键询价HRMVPCS 永生化人视网膜周细胞 QCH791
一周
3500¥
L363 人多发性骨髓瘤细胞 QCH792
一周
4000¥
Colo680N 人食管鳞癌细胞 QCH793
一周
4000¥
hTERT ipNF95.6 人纵状神经纤维瘤细胞 QCH794
一周
8500¥
MDA-PCA-2B 人前列腺癌细胞 QCH795
一周
4500¥
CORL23 人肺癌细胞(大细胞肺1癌)QCH796
一周
3500¥
T3M-4 人胰腺腺癌细胞 QCH797
一周
4500¥
CAL12T 人非小细胞肺癌细胞 QCH798
一周
3500¥
KMS-12-PE 人多发性骨髓瘤细胞 QCH799
一周
4000¥
EFO-27 人卵巢腺癌细胞 QCH800
钦诚生物 | 一周
4000¥
农杆菌EHA101感受态细胞
产品及特点EHA101 菌株为 C58 型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型 Ti 质粒 pEHA101 (pTiBo542DT-DNA),此质粒含有 vir 基因,vir 基因是 T-DNA 插 入植物基因组必需的元件。pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的 T-DNA 转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体 T-DNA 顺利转移。pEHA101 (pTiBo542DT-DNA) 型 Ti 质粒含有筛选标签:kan,赋予 EHA101 菌株卡那 霉素抗性,适用于玉米、水稻、烟草等植物的转基因操作。本公司生产的 EHA101 化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pK7WGF2 质粒(壮观霉素抗性)检测 转化效率>104cfu/μg DNA。EHA101 农杆菌的基因型是:C58 (rifR) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA)(kanR) Nopaline
规格及成分 成分 编号 10 支包装
EHA101 农杆菌感受态细胞 161205A 10×100 μL
pKWGF2(10ng/uL) LM161205B 10 μL
使用手册 1 份
运输及保存 干冰运输,-80℃保存,有效期一年。
自备试剂 质粒 DNA、液氮等
使用方法 转化前准备
1. 冰水浴和 37℃水浴。
2. 液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在 28℃培养箱中平衡至少 15 分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。
2. 每 100μL 感受态加 1μg(体积不大于 10 μL)质粒 DNA,用手拨打管底混匀,依次于冰上静置 5 分钟、液氮 5 分钟、37℃水浴 5 分钟、冰浴 5 分钟。
3. 加入 700μL 无抗生素的 LB 或 YEB 液体培养基,于 28℃振荡培养 2~3 小时。
4. 6000rpm 离心一分钟收菌,留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 LB 或 YEB 平板上,倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天(当平板只含有转化所用双元载体抗生素时,28℃培养 48 小时即可;平板中同时加入双元载体抗生素,20 μg/ml rif 时,需 28℃培养 60 小时;如果使用的平板含有 50 μg/ml rif 则需要 28℃培养 72-90 小时)。
注意事项
4. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的 1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
5. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
6. 平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量。
7. 利福平浓度不应高于 25 μg/mL,过高的利福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。本公司 EHA101 感受态计算转化效率时所用平板只含有 50 μg/mL kan,若所用平板含有 20 μg/mL rif 则转化效率降低到 1/2。
8. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止 Ti 质粒丢失,但链霉素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素,Ti 质粒丢失的概率极低(可以忽略)。