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大肠杆菌TG1化学感受态细胞
产品及特点本产品是采用大肠杆菌 TG1 菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可直接用于 DNA 的化学转化。
本试剂盒具有下列特点:
1. 使用 pUC19 质粒检测,转化效率可达 108,-80℃保存几个月转化效率不改变。
2. 可用于高效转化 150Kb 大小的质粒,可用于蓝白斑筛选。
3. 本产品质量稳定,使用方便,质优价廉。
号及其含义列表如下:
基因型符号 含义
K-12
K-12系的所有菌种默认都携带F因子和?、e14、rac
三种原噬菌体。其中的e14携带野生型mcrA基因,
其产物可对甲基化的CG切割。
F'[traD36
proAB+ lacI
q
lacZΔM
15]
本菌株携带的F因子上还携带下列染色体基因:突变
的traD36基因,使菌株能够发生结合但F因子转移
能力丧失;野生型proAB
+使菌株可以合成脯氨酸;
突变的lacI
q使得lac抑制蛋白过表达,降低lac启动
子的背景表达; lacZ△M15的?-半乳糖苷酶基因
可与携带?片段的质粒互补恢复酶活性,用于蓝白斑
筛选
△(lac-proAB )
缺失lac操纵子和脯氨酸合成基因,不能合成?-半乳糖苷酶和脯氨酸hsd△5
EcoK系统的甲基化酶失活,不会甲基化Eco位点的AsupE
同glnV,使得终止子UAG编码谷氨酰胺,减轻UAG
突变(琥珀突变)的伤害
thi-1 不能合成硫氨(维生素B1)
规格及成分 成分 编号 小扁盒包装
大肠杆菌 TG1 化学感受态细胞 LM80701 0.1 mL×10
使用手册 LM80701sc 1 份
4. 大肠杆菌 TG1 菌株基因型是 K-12, supE,thi-1,Δ(lac-proAB), Δ(mcrB-hsdSM)5, (rK -mK - ), F' [traD36 proAB+ lacI q lacZΔM15]。
规格及成分 成分 编号 小扁盒包装
大肠杆菌 TG1 化学感受态细胞 80701 0.1 mL×10
使用手册 80701sc 1 份
运输及保存 干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂 目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等
使用方法
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μl,可以根据实际情况分装使用。以下实验以 50 μl 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的 DNA(根据实际情况加入适量的 DNA,通常 100 μl 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴 30 分钟。
3. 42℃热击 90 秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置 2-3 分钟。
4. 每个离心管中加入 450 μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含有相应抗生素的 SOC 或 LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于 37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养 12-16 小时。
注意:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的 DNA 总量较少,可取 200-300 μl 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000 rpm ,2 分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。