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无酚无氯仿柱式植物RNAout
产品及特点
本产品是在柱式植物RNAOUT(CAT#:71203)的基础上经过配方和流程优化得到的无氯仿升级产品,它结合了植物RNAout的高效性、快捷性以及无氯仿处理的安全性。该产品特点如下:
1. 免酚和氯仿处理,操作安全可靠。
2. 简单快速,处理一个样品只需要约十分钟。
3. RNA 纯度更高,平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右,能够有效去除大 多数植物中的多糖污染。
4. 目前已测试过上百种植物。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交和cDNA合成等实验。
6. 性价比高于进口的柱式植物 RNA 提取产品。
规格及成分 成 份 编 号 大纸盒包装
无酚无氯仿植物 RNA 提取溶液 A LM160906a 50 mL 无酚无氯仿植物 RNA 提取溶液 B LM160906b 50 mL 离心吸附柱(宽口) LM60911 50 套 通用洗柱液 LM60408 50 mL RNA 洗脱液 LM71207 10 mL 使用手册 LM160906sc 1 份
运输及保存 常温运输和保存,有效期一年。
自备试剂 无
使用方法
1. 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要 50-100 mg 植物叶片、或30-50mg 植物种子、或 100-200mg 植物果实。不能多加,否则容易堵柱。无氯仿提取处理的量比常规的加氯仿处理量要少一倍,否则非常容易堵柱,但是否堵柱又取决于植物组织的多糖多酚的浓度。
2. 样品破碎:
1) 匀浆法:先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在 RNALOCKER 中的植物组织需用纸吸
注意:如果不小心将溶液 A 放置在 4℃,则可能会产生沉淀,使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 将匀浆物或液氮研磨物转移至干净的 1.5 mL 塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。有的植物组织(比如果实)含有大量水份,匀浆液会多于 1 mL,转移时也只取 1 mL。
4. 室温 12000-15000 g 离心 3-5 分钟,管底沉淀为细胞破碎物。
5. 将上清液(约 1 mL)转移到另一干净的 2 mL 塑料离心管中。
6. 加入等体积的溶液 B,充分颠倒混匀。如果有沉淀产生(对某些植物,属于正常现象),千万不要去掉沉淀,一定要把所有的混合物上柱。
7. 将 0.7mL 的混合溶液转移到离心吸附柱中,14000-15000 g 室温离心 3到 5 分钟,弃穿透液。如果离心吸附柱里面有残留液体没穿透,可以延长离心时间直到彻底穿透。
8. 将剩下的混合溶液按每次 0.7mL 的方式转移到同一离心吸附柱中, 每次13000-15000 g 室温离心 3-5 分钟,弃穿透液。
9. 由于混合液有 2mL 左右,所以三次转移即可将混合液全部挂柱。
10. 加 0.7 mL 通用洗柱液,室温 13000-15000 g 离心半分钟,弃穿透液。如果离心吸附柱里面有残留液体没穿透,可以延长离心时间直到彻底穿透。
11. 再加 0.3 mL 通用洗柱液,室温 13000-15000 g 离心半分钟,弃穿透液。
12. 12000 rpm 室温离心 10 秒以便去除残留液体。此步很重要,否则残留的乙醇会影响 RNA 的使用。
13. 将离心吸附柱转移到 RNase-free 收集管中,加入 50-100 uL RNA 洗脱液,室温放置 1-2 分钟。
14. 13000-15000 g 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 RNA 样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做 Northern 杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳,因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子(BioTechniques,28:414,2000)。
16. RNA 产量产率测定:将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的 RNA=40 μg/mL),进而计算出 RNA 的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
17. RNA 纯度测定:无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响 RT-PCR 等反应。