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NCI-H1417 人小细胞肺癌细胞 QCH835
钦诚生物 | 一周
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获取电话柱式软骨RNAout
产品及特点
本产品是专门从各种软骨组织样品中快速提取总RNA的试剂盒，它能有效克服传统TRIzol方法提取软骨组织RNA时，十分容易产生糖蛋白和酸性多糖污染这一缺点。
1. 能有效去除糖蛋白、粘蛋白和DNA污染，OD260/280一般均在1.9以上。
2. RNA产率一般为5-15 μ g/100 mg。
3. 操作简单，整个提取过程只需要十多分钟。
4. 得到的RNA可以直接用于RT-PCR、Northern杂交、mRNA纯化、PrimerExtension、RNA Protection、in vitro translation等研究。
使用及效果
将0.1 g左右的软骨在液氮中研磨成粉后转移到离心管中，加入1 mL溶液A并充分振荡混匀，加入0.3 mL溶液B和0.2 mL自备氯仿，振荡混匀，离心后转移上清液到一新离心管中并加入0.5 mL溶液C，混匀后转移到离心吸附柱中离心半分钟，用通用洗柱液洗离心吸附柱1-2次，后用100 μL RNA洗脱液洗脱即得到RNA。
产品及特点
由于血液富含RNase，因此血液RNA非常容易降解，是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。为解决此问题，本公司在非冻型组织RNA保存液的基础上，开发了本产品，它具有下列特点:
1. 能快速渗透到新鲜血液细胞内，抑制RNA分子的降解。保存的血液RNA常温可放置3天，4℃可放置5天，-20℃可放置3个月。
2. 操作简单，直接将本产品和新鲜血液细胞沉淀按比例混合即可。
3. 适用于人新鲜血和哺乳动物新鲜血液，不适用于陈旧血液和冻凝血液，也不适用于禽类血液和其他动物血液。
4. 重复性好，效果跟进口同类产品相当。
5. 保存的样品可直接用本公司血液RNAout提取RNA。
使用及效果
将本产品与新鲜血液样品按4:1的比例（4份本产品加1份新鲜血液）混合后即可放置。放置结束后将样品转移到离心管中，5000 g室温离心1分钟，小心吸出浅粉红色的上清液，棕红色沉淀（血细胞和蛋白沉淀）直接用于后续的总RNA提取。
1. 新鲜细胞：如果试剂没有问题，且外源性污染也可以排除，那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞，一定要使裂解液能覆盖住细胞。
2. 新鲜组织：某些富含内源核酸酶的样品(如肝脏，胸腺等)，即使使用电动匀浆器匀浆也不能避免RNA的降解。更可靠的方法是：在液氮条件下将组织研碎，并且匀浆时使用更多裂解液。
3. 冷冻样品：样品取材后应立即置于液氮中速冻，然后移至-70℃冰箱保存。样品决不能未经液氮速冻而直接保存于-70℃冰箱中。冷冻样品，即使是冷冻细胞，如果不在液氮条件下研磨碎，而直接加入裂解液中匀浆，RNA也比新鲜样品更容易降解。样品在与裂解液充分接触前决不能出现融化，所以研磨用具必须预冷，在碾磨过程中要及时补充液氮。样品研碎后，在液氮刚刚挥发完时，将样品迅速转移到含裂解液的容器中，立即混匀匀浆。
4. 外源RNA酶的污染：试剂，器械及实验环境中的RNA酶进入实验系统,可考虑华越洋产品：外源RNA酶清除剂（RNase remover)解决。
5. 内源RNA酶的污染：抑制剂失效或者用量不够，实验样品过多；匀浆时温度过高。
RNA提取得率低
1. 该组织或者细胞中RNA含量偏低：不同细胞和组织中RNA的丰度不同，如肝脏，胰腺，心脏等是高丰度组织(总RNA含量2-4μg/mg)，脑，胚胎，肾脏，肺，胸腺，卵巢等是中丰度组织(总RNA含量0.05-2μg/mg)，膀胱，骨，脂肪等是低丰度组织(总RNA含量<0.05μg/mg)。
2. 组织起始量太少或者太多：样品量过少，则细胞组织中RNA含量较低；样品量过多则可能超过裂解液的裂解能力，裂解将不完全，从而导致RNA得率低。
