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大豆内源基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
大豆内源基因核酸检测试剂盒(一管式 PCR-荧光探针法)
◆ 产品说明
转基因检测系列可针对食品、饲料等样品中转基因成分的特异核酸片段进行扩增,通过实时扩增曲
线判定结果。本产品用于大豆内源基因成分的检测,检出限为 0.1%。
◆ 产品组成(48 测试)
试剂 含量
A-Lectin-P 20μL × 8 管× 6 排
NG -P 100μL × 2 支
PG-Lectin-P 100μL × 1 支
◆ 适用仪器
ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等实时荧光 PCR 仪。
◆ 自备耗材和仪器
①冰盒;②移液器(0.5-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套灭菌吸头;③离心机;④涡旋混匀器;⑤金属
浴;⑥均质机、搅拌机或研钵等研磨器具;⑦电子天平。
◆ 注意事项
1.本试剂检测灵敏度高。为了防止污染,实验要分区操作。
1)一区:样本制备区。
2)第二区:模板添加区。
3)第三区:扩增及产物分析区。
★ 分区之间好进行物理性隔离,避免人为因素造成的污染。
2.实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,不同区域独立使用工具,需更换手套和实验服。
3.严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4.反应液中的成分对光敏感,应避光保存。试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融,推荐使用前离心 30
秒,并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
5.反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,开盖易造成气溶胶污染,禁止开盖。
6.不同批号试剂请勿混合使用,在有效期内使用。
◆ 样品处理
参照《GB/T 19495.3-2004 转基因产品检测 核酸提取纯化方法》或其他标准处理样品,除了处于食物和(或)
饲料链起始端的农产品和粗加工材料(如粉碎的产品),大多数工业加工的食品经过了物理、化学及酶的处理。这
些处理会降低 DNA 的含量及纯度。因此,每一方法的适用性及重复性会随特异样品而异,一种特定的 DNA 提取方
法的性质特征依赖于被研究的食品种类。实验室样品的代表性应符合《GB/T 19495.7-2004 转基因产品检测 抽样和
制样方法》。制备的样本保存待用。
详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。
★ 若使用非一次性研磨器研磨样品,一定要彻底清洗研磨器并充分干燥后再进行下一份样品的研磨,防止交叉污染。
◆ 实验操作
请于-20℃条件下保存,有效期 12 个月
1.模板制备(样本制备区)
建议使用配套植物基因组 DNA 提取试剂盒,具体过程详见产品说明书。
2.添加模板(模板添加区,放置于冰盒上进行)
剪下所需测试数的已含有反应液的 PCR 管,放置在室温待解冻后,离心 30 秒后揭开封口膜,向每管反应液
中分别加入 5μL 模板,顺序为 NG、待测样品模板、PG-Lectin-P。盖好配套的 PCR 管盖后,涡旋混匀 30s,离心 1min,
立即进行 PCR 扩增反应。
3.扩增反应(扩增及产物分析区)
使用荧光定量 PCR 仪,荧光基团选择 FAM,淬灭基团选择 TAMRA。
按下列条件设置扩增反应:
PCR 循环 荧光收集位点
95℃ 10 分钟 1 个循环 —
95℃ 15 秒
40 个循环
—
60℃ 1 分钟 ※
4. 基线和阈值设定
基线调整取 3-15 个循环的荧光信号,阈值线应超过阴性对照扩增曲线的高点
◆ 结果判定
检测样品无 Ct 值或≥40,曲线为直线或轻微斜线,无“S”型扩增曲线,可报告样品阴性,不含有大豆内源基因
或含量低于检出限;
检测样品 Ct≤36,曲线呈“S”型扩增曲线,可直接报告样品阳性,含有大豆内源基因;
检测样品 36<Ct<40,需进行一次重复实验,若 Ct 值仍处于 36 和 40 之间且呈“S”型扩增曲线,同时各种实验
对照结果正常,报告样品阳性,否则报告样品阴性。
★NG 反应为平滑直线,PG 反应为“S”型扩增曲线,此次检测结果有效,否则无效。如重复检测结果仍为无效,请与技术支持人
员联系。