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虾源性成分核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
虾源性成分核酸检测试剂盒(一管式 PCR-荧光探针法)
◆ 产品说明
物种鉴定系列中的过敏原鉴定试剂,可针对食品中过敏原成分的特异核酸片段进行扩增,通过实时扩
增曲线判定结果。本产品用于食品及其原料中过敏原虾成分的检测,可于一个反应中同时检测虾与北极虾,检出限
为 0.01%。(需注意:FAM 通道的检测引物为虾的检测引物,对海蟹、虾/蟹爬、虎头蟹、赤甲蟹有非特异性扩增。
VIC 通道的为北极虾的检测引物。)
◆ 产品组成(96 测试)
试剂 含量
A-虾源-P 20μL × 8 管× 12 排
NG-P 100μL × 3 支
PG-虾源-P 100μL × 2 支
◆ 适用仪器
ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等实时荧光 PCR 仪。(可同时检测 FAM 通道(494 nm)、VIC 通
道(538nm)两种通道的荧光定量 PCR 仪)。 ◆ 自备耗材和仪器
①冰盒;②移液器(0.5-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套灭菌吸头;③离心机;④涡旋混匀器;⑤金属浴。
◆ 注意事项
1.本试剂检测灵敏度高。为了防止污染,实验要分区操作。
1)一区:样本制备区。
2)第二区:模板添加区。
3)第三区:扩增及产物分析区。
★ 分区之间好进行物理性隔离,避免人为因素造成的污染。
2.实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,不同区域独立使用工具,需更换手套和实验服。
3.严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4.反应液中的成分对光敏感,应避光保存。试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融,推荐使用前离心 30
秒,并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
5.反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,开盖易造成气溶胶污染,禁止开盖。
6.不同批号试剂请勿混合使用,在有效期内使用。
◆样品处理
参照《SN/T 1961.10-2013 出口食品过敏原成分检测 第 10 部分:实时荧光 PCR 方法检测虾/蟹成分》或其他标
准处理样品,制备的样本保存待用。
样品的采集和制备是过敏原成分鉴别的重要步骤,防止交叉污染的措施按照 GB/T 27403 中的规定执行。
详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。
◆ 实验操作
1.模板制备(样本制备区)
请于-20℃条件下保存,有效期 12 个月
SM-021132LⅡ-A02
2
建议使用配套动物基因组 DNA 提取试剂盒,具体过程详见产品说明书。
2.添加模板(模板添加区,放置于冰盒上进行)
剪下所需测试数的已含有反应液的 PCR 管,放置在室温待解冻后,离心 30 秒后揭开封口膜,向每管反应液
中分别加入 5μL 模板,顺序为 NG、待测样品模板、PG-虾源-P。盖好配套的 PCR 管盖后,涡旋混匀 30s,离心 1min,
立即进行 PCR 扩增反应。
3.扩增反应(扩增及产物分析区)
使用荧光定量 PCR 仪,使用 FAM 和 VIC 通道。
按下列条件设置扩增反应:
PCR 循环 荧光收集位点
95℃ 30 秒 1 个循环 —
95℃ 15 秒
45 个循环
—
60℃ 40 秒 ※
4.基线和阈值设定
基线调整取 3-15 个循环的荧光信号,阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性
对照扩增曲线(无规则的噪音线)的高点,且 Ct 值不出现任何数值为准。
◆结果判定
同时进行的阴性、阳性、空白对照实验结果正常,检测样品 FAM 与 VIC 通道均无荧光增幅现象,判断样品中
未检出致敏原虾成分。
同时进行的阴性、阳性、空白对照实验结果正常,检测样品有明显的荧光增幅曲线,且 Ct 值≤35,判断样品
中检出致敏原虾成分。
同时进行的阴性、阳性、空白对照实验结果正常,若检测样品荧光增幅曲线的 Ct 值在 35-40 之间,则应重新进
行实时荧光 PCR 反应。再次扩增后的结果 Ct 值仍在 35-40 之间,可判断样品中检出致敏原虾成分,否则可判断样
品中未检出过敏原虾成分。
FAM 与 VIC 通道其中有一个检测结果为阳性,即可判断该样品中检出致敏原虾成分。
★ NG 反应为平滑直线,PG 反应为“S”型扩增曲线,此次检测结果有效,否则无效。如重复检测结果仍为无效,请与技术支持
人员联系。