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铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒(恒温荧光法)
铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒(恒温荧光法)
◆ 产品说明
致病菌检测系列基于独特的恒温荧光检测技术,可针对食品、饲料等样品中的致病微生物的特异核
酸片段进行扩增,仪器实时监测扩增过程中的荧光信号变化,自动判读结果。本产品用于铜绿假单胞菌的检测。检
出限为 10
3 CFU/ml。
◆ 产品组成(48 测试)
试剂 含量
A-PA-I 1200μL × 1 支
B-I 55μL × 1 支
C-I
SM-011111M-A02
2
应尽可能及时检验,若不能及时检验,应置于 4℃冰箱保存,并在 24h 内检验。
按无菌操作取检样 25 g(ml)样品至 225 ml SCDLP 增菌液中,充分摇匀,于 36 ℃±1 ℃培养 24 h±2 h。
详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。
◆ 实验操作
将试剂完全解冻,各组分离心 30s。
1. 试剂配制(试剂准备区,放置于冰盒中进行):
若有 N 个待检样品,则参照下表,按照 N+2 个数量计算各组分用量(N 个待检样品+1 个阴性对照+1 个阳性
对照),将反应液置于 0.6ml 或者 1.5ml 离心管中,涡旋混匀,离心 30 秒,分装于 0.2ml PCR 管中,并向每管加入 1
滴 C-I(约 20μl)。
试剂 使用量
A-PA-I 22×(N+2)μL
B-I 1×(N+2)μL
反应液总体积 23×(N+2)μL
2.模板制备(样本制备区)
建议使用试剂配套细菌组 DNA 提取系列产品,具体过程详见产品说明书。
3.添加模板(模板添加区,放置于冰盒中进行)
在步骤 1 中已含有反应液的 PCR 管中加入 2μL 模板,顺序为 NG-I、待测样品模板、PG-PA-I。涡旋混匀 30s,
离心 1min,立即进行扩增反应。
4. 扩增反应(扩增及产物分析区)
①恒温仪器 63℃条件下反应 30min。
②若使用荧光定量 PCR 仪,则荧光基团选择 FAM,淬灭基团选择 None,将 63℃ 15 s,63℃ 45 s 作为一个
循环,于 63℃ 45 s 处收集荧光信号,30 个循环。
其他仪器请参照仪器说明书进行设置。
◆ 结果判定
①仪器自动判定结果,若显示“阳性”,则样品中含有铜绿假单胞菌;若显示“阴性”,则样品中不含有铜绿假单
胞菌或含量低于检测限。
②在荧光定量 PCR 仪上,根据有无“S”型扩增曲线判定结果。若有“S”型扩增曲线,则样品中含有铜绿假单胞菌;
若无“S”型扩增曲线,则样品中不含有铜绿假单胞菌或含量低于检测限。
SM-011111M-A02
3
★ NG 反应管结果显示“阴性”,PG 反应管结果显示“阳性”,此次检测结果有效,否则无效。如重复检测结果仍为无效,请与技
术支持人员联系。