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阪崎肠杆菌核酸检测试剂盒(恒温荧光法)
水的锥形瓶中,用手缓缓地摇动至充分溶解,
请于-20℃条件下保存,有效期 12 个月
SM-011121M-A02
2
36 ℃±1 ℃培养 18 h±2 h。移取 1ml 转种于 10ml ST-Vm 肉汤,44℃±0.5℃培养 24h±2h。
详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。
◆ 实验操作
将试剂完全解冻,各组分离心 30s。
1. 试剂配制(试剂准备区,放置于冰盒中进行):
若有 N 个待检样品,则参照下表,按照 N+2 个数量计算各组分用量(N 个待检样品+1 个阴性对照+1 个阳性
对照),将反应液置于 0.6ml 或者 1.5ml 离心管中,涡旋混匀,离心 30 秒,分装于 0.2ml PCR 管中,并向每管加入 1
滴 C-I(约 20μl)。
试剂 使用量
A-ES-I 22×(N+2)μL
B-I 1×(N+2)μL
反应液总体积 23×(N+2)μL
2.模板制备(样本制备区)
建议使用试剂配套细菌组 DNA 提取系列产品,具体过程详见产品说明书。
3.添加模板(模板添加区,放置于冰盒中进行)
在步骤 1 中已含有反应液的 PCR 管中加入 2μl 模板,顺序为 NG-I、待测样品模板、PG-ES-I。涡旋混匀 30s,
离心 1min,立即进行扩增反应。
4. 扩增反应(扩增及产物分析区)
①恒温仪器 63℃条件下反应 30min。
②若使用荧光定量 PCR 仪,则荧光基团选择 FAM,淬灭基团选择 None,将 63℃ 15 s,63℃ 45 s 作为一个
循环,于 63℃ 45 s 处收集荧光信号,30 个循环。
其他仪器请参照仪器说明书进行设置。
◆ 结果判定
①仪器自动判定结果,若显示“阳性”,则样品中含有阪崎肠杆菌;若显示“阴性”,则样品中不含有阪崎肠杆菌
或含量低于检测限。
②在荧光定量 PCR 仪上,根据有无“S”型扩增曲线判定结果。若有“S”型扩增曲线,则样品中含有阪崎肠杆菌;
若无“S”型扩增曲线,则样品中不含有阪崎肠杆菌或含量低于检测限。
SM-011121M-A02
3
★ NG 反应管结果显示“阴性”,PG 反应管结果显示“阳性”,此次检测结果有效,否则无效。如重复检测结果仍为无效,请与技
术支持人员联系。