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对虾白斑综合症病毒(WSSV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
对虾白斑综合症病毒(WSSV)核酸检测试剂盒(一管式 PCR-荧光探针法)
◆ 产品说明
动物病害检测系列可针对食品、动物组织等样品中病原的特异核酸片段进行扩增,通过实时扩增
曲线判定结果。本产品用于对对虾白斑综合症病毒(WSSV)的检测,检出限为 10
3copies/μL 基因组 DNA。
◆ 产品组成(96 测试)
试剂 含量
A-WSSV-P 20μL × 8 管× 12 排
NG-P 100μL × 3 支
PG-WSSV-P 100μL × 2 支
◆ 适用仪器
ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等实时荧光 PCR 仪。
◆ 自备耗材和仪器
①冰盒;②移液器(0.5-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套灭菌吸头;③离心机;④涡旋混匀器;⑤金属
浴;⑥均质机、搅拌机或研钵等研磨器具;⑦电子天平。
◆ 注意事项
1.本试剂检测灵敏度高。为了防止污染,实验要分区操作。
1)一区:样本制备区。
2)第二区:模板添加区。
3)第三区:扩增及产物分析区。
★ 分区之间好进行物理性隔离,避免人为因素造成的污染。
2.实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,不同区域独立使用工具,需更换手套和实验服。
3.严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4.反应液中的成分对光敏感,应避光保存。试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融,推荐使用前离心 30
秒,并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
5.反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,开盖易造成气溶胶污染,禁止开盖。
6.不同批号试剂请勿混合使用,在有效期内使用。
◆ 样品处理
①样品的采集和制备是对虾白斑综合症病毒检测的重要步骤,为防止交叉污染,应使用一次性消耗品,研钵应
经 160℃干烤 2 h,其他不宜干烤或高压处理的器皿应使用 1%次**钠溶液浸泡。②优先采集有症状的或活力差的
个体。对于成虾取鳃或上皮、肝胰腺、肠、胃、游泳足或步足等病灶部位,活力差的个体采集 10-20 尾/池,活力好
的个体至少多点采集 150 尾/池后混匀再随机抽检 10-20 尾。对于幼虾、仔虾、幼体或受精卵取整体,活力差的个体
至少采集 20 尾/池,活力好的虾苗至少采集 150 尾/池。同一批样品,建议多点采集合并后,作为一份样品进行均质,
提取 DNA。③采样过程应快速完成,将采取的样品放入无菌均质袋中均质成糜状,充分混匀。更多样品前处理的
注意事项可咨询我司技术支持人员。
◆ 实验操作
1.模板制备(样本制备区)
建议使用配套水生动物病毒基因组 DNA/RNA 提取试剂盒系列产品,具体过程详见产品说明书。
2.添加模板(模板添加区,放置于冰盒上进行)
剪下所需测试数的已含有反应液的 PCR 管,放置在室温待解冻后,离心 30 秒后揭开封口膜,向每管反应液
SM-031012LⅡ-A01
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中分别加入 5μL 模板,顺序为 NG、待测样品模板、PG-WSSV-P。盖好配套的 PCR 管盖后,涡旋混匀 30s,离心 1min,
立即进行 PCR 扩增反应。
3. 扩增反应(扩增及产物分析区)
使用荧光定量 PCR 仪,荧光基团选择 FAM,淬灭基团选择 TAMRA。
按下列条件设置扩增反应:
PCR 循环 荧光收集位点
95℃ 15 分钟 1 个循环 —
95℃ 15 秒
40 个循环
—
60℃ 2 分钟 ※
其他仪器请参照仪器说明书进行设置。
◆ 结果判定
检测样品无 Ct 值或≥40,曲线为直线或轻微斜线,无“S”型扩增曲线,可报告样品阴性,不含有对虾白斑综合
症病毒(WSSV)或含量低于检出限;
检测样品 Ct≤36,曲线呈“S”型扩增曲线,可直接报告样品阳性,含有对虾白斑综合症病毒(WSSV);
检测样品 36<ct≤40,需进行一次重复实验,若 ct="" 值仍处于="" 36="" 和="" 40="" 之间且呈“s”型扩增曲线,同时阴性对照无<="" p="">
Ct 值,报告样品阳性,否则报告样品阴性。
★ NG 反应为平滑直线,PG 反应为“S”型扩增曲线,此次检测结果有效,否则无效。如重复检测结果仍为无效,请与技术支持
人员联系。
参考结果图
◆