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获取电话pHH43大肠杆菌菌蜕制备质粒
基本信息
别名: pHH-43
复制子: colE1 ori
质粒分类: 大肠杆菌菌蜕制备质粒
原核抗性: 氯霉素Chloramphenicol
克隆菌株: 大肠杆菌DH5α
培养条件: 30℃，有氧，LB
质粒简介
pHH43是构建有φX174噬菌体裂解蛋白的温控型表达质粒。该质粒可以转化入大肠杆菌DH5α中,诱导细菌裂解制备大肠杆菌DH5α菌蜕。在大肠杆菌杆菌上面打孔制造菌影，那段基因的酶切位点是kpn i和EcoR V，由于含有E裂解基因，超过38度就可以引发，所以培养最好30度左右。
质粒图谱
pHH43大肠杆菌菌蜕制备质粒使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pHH43大肠杆菌菌蜕制备质粒注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
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