获取电话pRS403酿酒酵母质粒
基本信息
复制子: pUC ori，FI ori
质粒分类: 酵母系列质粒；酵母表达质粒；酿酒酵母质粒
质粒大小: 4456bp
原核抗性: 氨苄青霉素Amp（100μg/ml）
筛选标记: HIS3
克隆菌株: DH5α等大肠杆菌
培养条件: 37℃，有氧 LB
表达宿主: YPH499，YPH500等酿酒酵母
培养条件: 30℃，YPD，有氧
5'测序引物: T7(TAATACGACTCACTATAGGG)
3'测序引物: M13R(CAGGAAACAGCTATGACC)
质粒简介
pRS4xx系列质粒被用于基因的穿梭载体克隆酿酒酵母，但能够在大肠杆菌中复制。虽然在大肠杆菌中，他们从pMB1的复制原点复制至pBR322。他们携带的bla（APR）标记用于选择用氨苄青霉素和复制的噬菌体F1原点单链DNA 。pRS403 through pRS406 are integrative plasmids (YIp); pRS413through pRS416 (shown below) are centromeric plasmids (YCp),and differ from the YIp by the insertion of a centromere (CEN)and autonomously replicating sequence (ARS); pRS423 throughpRS426 are episomal plasmids (YEp), and carry instead theorigin of replication from the yeast 2μ circle plasmid along withREP3 and FRT sequences (2). The 4 vectors in each series differonly in the yeast auxotrophic marker used: HIS3 (pRS4x3), TRP1(pRS4x4), LEU2 (pRS4x5) or URA3 (pRS4x6).
质粒图谱
pRS403酿酒酵母质粒使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pRS403酿酒酵母质粒注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
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