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钦诚生物 | 一周
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pPICZαC毕赤酵母质粒
基本信息
启动子: AOX1 promoter
复制子: pUC ori
终止子: AOX1
质粒大小: 3598bp
质粒标签: C-Myc, C-His
原核抗性: Zeo
筛选标记: Zeo
克隆菌株: DH5α
培养条件: 37℃,有氧,LB
表达宿主: 酵母细胞
5'测序引物: AOX5:GACTGGTTCCAATTGACAAGC
3'测序引物: AOX3:GGCAAATGGCATTCTGACAT
质粒简介
pPICZαA,B和C是3.6 kb的毕赤酵母蛋白分泌表达载体。表达的重组蛋白是融合蛋白,含有一个N-端多肽,编码酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)α-因子分泌信号。载体能够在毕赤酵母中利用甲醇诱导的高水平的表达目的蛋白,并且可以用在任何毕赤酵母中,包括X33,GS115菌株,SMD1168H,KM71H。pPICZα A,B和C系列载体包含以下内容:①5'端含有AOX1启动子的严格调控,利用甲醇诱导表达任何感兴趣的基因(Ellis等,1985; Koutz等人,1989;tschopp等人,1987A)。②α-因子分泌信号能够分泌性表达目的蛋白。③Zeocin抗性基因在大肠杆菌和毕赤酵母都能用于筛选(Baron等人,1992; Drocourt等人,1990)。④C-端含Myc和His标签,可以用于检测和纯化重组蛋白。⑤pPICZ A, B, C三种读码框使得可以将基因克隆入载体而不发生任何移码突变。
质粒图谱
pPICZαC毕赤酵母质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pPICZαC毕赤酵母质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。
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