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获取电话pPICZA-EGFP毕赤酵母质粒
基本信息
启动子: AOX1 promoter
复制子: ori
终止子: CYC1
质粒大小: 3328bp
质粒标签: C-Myc, C-His
原核抗性: Zeo
筛选标记: Zeo
克隆菌株: DH5α等大肠杆菌
培养条件: 37℃，有氧，LB
表达宿主: 酵母细胞
5'测序引物: AOX5:GACTGGTTCCAATTGACAAGC
3'测序引物: AOX3:GGCAAATGGCATTCTGACAT
质粒简介
pPICZ A，B和C是3.3 kb的毕赤酵母蛋白载体。表达的重组蛋白是融合蛋白，含有一个C-端多肽，多太重含c-myc和C-His标签。载体能够在毕赤酵母中利用甲醇诱导的高水平的表达目的蛋白，并且可以用在任何毕赤酵母中，包括X33，GS115菌株，SMD1168H，KM71H。pPICZ特点：1.5'片段含有AOX1启动子的严格调控，利用甲醇诱导表达任何感兴趣的基因 2.Zeocin抗性基因在大肠杆菌和毕赤酵母都能用于筛选 3.C-端含Myc和His标签，可以用于检测和纯化重组蛋白 4.pPICZ A, B, C三种读码框使得可以将基因克隆入载体而不发生任何移码突变。
质粒图谱
pPICZA-EGFP毕赤酵母质粒使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pPICZA-EGFP毕赤酵母质粒注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
