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pPIC3.5K毕赤酵母质粒

pPIC3.5K毕赤酵母质粒

价格: 980

品牌:钦诚生物

供货周期: 现货

货号:QCP0212

型号:2UG

pPIC3.5K毕赤酵母质粒

 

基本信息

 

启动子: AOX1

复制子: pBR322 ori

质粒分类: 酵母系列,毕赤酵母表达载体

质粒大小: 9004bp

原核抗性: Amp

筛选标记: HIS4

克隆菌株: DH5α

培养条件: 37℃,有氧 LB

表达宿主: 酵母细胞

5'测序引物: AOX5:GACTGGTTCCAATTGACAAGC

3'测序引物: AOX3:GGCAAATGGCATTCTGACAT

 

质粒简介

    PIC3.5K是一个鉴定多拷贝基因插入到毕赤酵母基因组中的载体。 1. pPIC3.5K载体大小为9004 bp2. 在多克隆位点区域,拥有5个单一的限制性酶切位点:BamH ISnab IEcoR IAvr IINot I3.胞内表达。 4.载体构建时,需要包含一个ATG启动子,同时需要加入Kozak序列。 (Cavener and Stuart, 1991; Kozak, 1987; Kozak, 1990) 5. 毕赤酵母中使用HIS4基因筛选。 6.  将基因插入GS115KM71AOX1中,需要使用Sac I线性化质粒(GS115产生的基因型为His+ Mut+KM71酵母产生的基因型为His+ MutS)7. 将基因插入GS115KM71HIS4中,需要使用Sal I线性化质粒(GS115产生的基因型为His+ Mut+KM71酵母产生的基因型为His+ MutS)8. 将基因插入GS115AOX1基因中,也可以使用Bgl II 限制酶线性化质粒,产生的酵母基因型为His+ MutS。 

pPIC3.5K1.png

 

质粒图谱pPIC3.5K.png

 

 

pPIC3.5K毕赤酵母质粒使用说明:

    

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;

     4、42℃热激90s,再冰浴2min;

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;

     6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;

     8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。

 

pPIC3.5K毕赤酵母质粒注意事项

 

      1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。

 





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