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pBI121①植物表达质粒
基本信息
启动子: CaMV 35S promoter
复制子: oriV
终止子: NOS
质粒分类: 植物系列,蛋白过表达载体
质粒大小: 14758bp
原核抗性: 卡那霉素Kan
筛选标记: 遗传霉素G418/新霉素Neo
克隆菌株: 大肠杆菌DH5α
培养条件: 37℃,有氧 LB
5'测序引物: 35S:GACGCACAATCCCACTATCC
3'测序引物: 根据序列设计引物
质粒简介
pBI121载体是一个双元植物农杆菌表达载体,能够高效转染植物。该载体来源于pB221和Bin19载体。载体上含有从ColE1来源的ori复制元件,从CaMV中来源的pROK1元件,大肠杆菌新霉素磷酸转移酶II基因(Neomycin phosphotransferase II Gene, NptII),新霉素抗性基因(Neomycin resistant gene, Neo), 敏感基因Beta葡糖苷酸酶(glucuronidase),Ter 农杆菌Ti 质粒胭脂氨酸合成酶原件等。pBI121载体是卡那抗性质粒。
质粒图谱
pBI121①植物表达质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pBI121①植物表达质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。