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获取电话pEE6.4哺乳抗体质粒
基本信息
启动子: hCMV-MIE
复制子: pEE6 ori
终止子: SV40 poly(A) signal
质粒分类: 哺乳细胞，抗体表达载体
质粒大小: 5067bp
原核抗性: 氨苄青霉素Amp
克隆菌株: 大肠杆菌DH5α
培养条件: 37℃，有氧，LB
表达宿主: 哺乳细胞
诱导方式: 无须诱导，瞬时表达
5'测序引物: CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG
3'测序引物: 根据序列设计引物
质粒简介
Lonza生物公司的Glutamine Synthetase(GS, 谷氨酰胺合成酶)基因表达系统载体pEE6.4载体，利用谷氨酰胺合成酶筛选标记，能够高水平的在哺乳细胞内表达目的基因。GS酶是生物体内以谷氨酸和氨为底物合成谷氨酰胺的酶。GS酶的活性能够被甲硫氨酸砜亚胺（methionine sulphoximine，MSX）选择性的抑制。一些哺乳动物细胞，例如小鼠骨髓瘤细胞(NSO细胞系)无法表达GS，所以在不添加谷氨酰胺的情况下， 细胞将无法生长。对于这些细胞系，在无谷氨酰胺的培养基内，一个转染的GS基因可以作为一个筛选标记。其他的一些细胞系，例如CHO-KI，能够产生内源 性的GS酶。对于这些细胞，在无谷氨酰胺培养基内，在高水平足够抑制GS酶合成的MSX（甲硫氨酸砜亚胺）的作用下，可以对细胞的生长提供一个选择压力。
质粒图谱
pEE6.4哺乳抗体质粒使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pEE6.4哺乳抗体质粒注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
