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p3×FLAG-CMV-10哺乳表达质粒
基本信息
启动子: CMV promoter
复制子: F1 ori , pUC ori
终止子: SV40 poly(A) signal,hGH poly(A) signal
质粒分类: 哺乳系列质粒;哺乳表达质粒;pCMV系列质粒
质粒大小: 6299bp
质粒标签: N-3×FLAG
原核抗性: 氨苄青霉素Amp(100μg/ml)
筛选标记: 新霉素Neo/G418
克隆菌株: DH5α等大肠杆菌
培养条件: 37℃,有氧 LB
表达宿主: 293T等哺乳细胞
培养条件: 37℃,5%CO2
诱导方式: 无须诱导,瞬时表达
5'测序引物: CMV-F(CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG)
3'测序引物: hGH-PA-R(CCAGCTTGGTTCCCAATAGA)
质粒简介
p3×FLAG-CMV-10表达载体是用于在哺乳动物细胞中建立N-3×FLAG融合蛋白的瞬时或稳定细胞内的pCMV5表达载体的升级版。该载体在多克隆区域上游编码三个相邻的FLAG表位(Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp)。这导致使用FLAG抗体的检测灵敏度增加。第三个FLAG表位包括肠激酶识别序列,允许从纯化的融合蛋白切割3×FLAG肽。
The p3×FLAG-CMV-10 Expression Vector is a 6.3 kb derivative of pCMV5 used to establish transient or stable intracellular expression of N-terminal 3XFLAG fusion proteins in mammalian cells. The vector encodes three adjacent FLAG® epitopes (Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp) upstream of the multiple cloning region. This results in increased detection sensitivity using ANTI-FLAG M2 antibody. The third FLAG epitope includes the enterokinase recognition sequence, allowing cleavage of the 3XFLAG peptide from the purified fusion protein. Efficiency of replication is optimal when using an SV40 T antigen expressing host.
p3×FLAG-CMV-10 Expression Vector is a shuttle vector for E. coli and mammalian cells. Efficiency of replication is optimal when using an SV40 T antigenexpressing
host, such as COS cells.
质粒图谱
p3×FLAG-CMV-10哺乳表达质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
p3×FLAG-CMV-10哺乳表达质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。
p3×FLAG-CMV-10哺乳表达质粒多少钱?
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