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获取电话pACYCDuet-1大肠双表达质粒
基本信息
启动子: T7/Lac
复制子: p15A ori
终止子: T7 terminator
质粒分类: 大肠系列质粒；大肠其它质粒；大肠双框质粒
质粒大小: 4008bp
质粒标签: N-6×His,C-S
原核抗性: 氯霉素Chl（50μg/ml）
克隆菌株: DH5α等大肠杆菌
培养条件: 37℃，有氧，LB
表达宿主: BL21(DE3)等大肠杆菌
培养条件: 37℃，有氧，LB
诱导方式: IPTG或乳糖及其类似物
5'测序引物: ACYCDuetUP1(GGATCTCGACGCTCTCCCT) DuetUP2( TTGTACACGGCCGCATAATC)
3'测序引物: DuetDOWN1( GATTATGCGGCCGTGTACAA) T7-ter(TGCTAGTTATTGCTCAGCGG)
备注: 同时表达两个外源蛋白
质粒简介
pACYCDuet-1质粒是一种原核表达载体， N端含有一个6×His标签，C端含有一个S标签。该质粒含有多个常用的酶切位点，便于不同基因克隆。表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导，目的基因被克隆到质粒载体上，受噬菌体强转录及翻译信号控制。
该质粒还携带有p15A复制因子、lacI基因和氯霉素抗性基因。可以使这个pETDuet-1载体在一个适当的宿主菌株的coexpression 4目标基因插入MCS1的基因可以使用ACYCDuetUP1引物和DuetDOWN1引物进行测序。插入MCS2的基因可以用DuetUP2引物和T7进行排序。
pACYCDuet-1 is designed for the coexpression of two target genes. The vector contains two multiple cloning sites (MCS), each of which is preceded by a T7 promoter/lac operator and ribosome binding site (rbs). The vector also carries the P15A replicon, lacI gene and chloramphenicol resistance gene. This vector can be used in combination with pETDuet™-1 in an appropriate host strain for the coexpression of up to 4 target genes. Genes inserted into MCS1 can be sequenced using the ACYCDuetUP1 Primer and DuetDOWN1 Primer . Genes inserted into MCS2 can be sequenced using the DuetUP2 Primer and T7 Terminator Primer .
质粒图谱
pACYCDuet-1大肠双表达质粒使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pACYCDuet-1大肠双表达质粒注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
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