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获取电话pCold III大肠表达质粒
基本信息
启动子: CspA promoter
复制子: F1 ori,ori
质粒分类: 大肠系列质粒；大肠表达质粒；pCold系列质粒
质粒大小: 4377bp
原核抗性: 氨苄青霉素Amp（100μg/ml）
克隆菌株: DH5α等大肠杆菌
培养条件: 37℃，有氧，LB
表达宿主: BL21等大肠杆菌
培养条件: 37℃，有氧，LB
诱导方式: IPTG或乳糖及其类似物
5'测序引物: pCold-F（ACGCCATATCGCCGAAAGG）
3'测序引物: pCold-R（GGCAGGGATCTTAGATTCTG）
质粒简介
pCold III质粒是利用冷休克基因CspA启动子设计高效率蛋白质表达载体。在启动子下游处，插入了lac操纵子，以便严格控制表达。此外，5’非翻译区（5’UTR），翻译增强元件（TEE）,His标签序列，Xa因子切割位点和多克隆位点（MCS）位于CAPS启动子的下游。当培养温度切换到低温时，大肠杆菌暂时停止生长，大部分的大肠杆菌蛋白质表达减少，但是一类称为冷休克蛋白的蛋白质被特异性诱导表达。
质粒图谱
pCold III大肠表达质粒使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pCold III大肠表达质粒注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
