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pET-32a大肠表达质粒

pET-32a大肠表达质粒

价格: 980

品牌:钦诚生物

供货周期: 现货

货号:QCP0033

规格:2UG

pET-32a大肠表达质粒

 

基本信息

 

别名: pET32a,pET-32a(+)

启动子: T7/lac promotor

复制子: ColE1 ori,F1 ori

终止子: T7 terminator

质粒分类: 大肠系列质粒;大肠表达质粒;pET系列质粒

质粒大小: 5900bp

质粒标签: N-Trx,N-6×His,N-thrombin,N-S,N-enterokinase,C-6×His

原核抗性: 氨苄青霉素Amp(100μg/ml)

克隆菌株: DH5α等大肠杆菌

培养条件: 37℃,有氧,LB

表达宿主: BL21(DE3)等大肠杆菌

培养条件: 37℃,有氧,LB

诱导方式: IPTG或乳糖及其类似物

5'测序引物: T7(TAATACGACTCACTATAGGG)

3'测序引物: T7-ter(TGCTAGTTATTGCTCAGCGG)


质粒简介

        pET-32a质粒是一种原核表达载体,C端含有一个6×His标签,N端含有一个thrombin位点、6×His标签、TrXA位点、Ek位点和S标签。该质粒含有多个常用的酶切位点,便于不同基因克隆。表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导,目的基因被克隆到质粒载体上,受噬菌体强转录及翻译信号控制。

        pET系统是有史以来在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能最强大的系统,也是现今原核表达方面使用最广泛的系统。该系列质粒能很容易的通过降低诱导物的浓度来削弱蛋白表达。在非诱导条件下,可以使目的基因处于完全沉默状态而不转录。

     The pET-32 series is designed for cloning and high-level expression of peptide sequences fused with the 109aa Trx•Tag™ thioredoxin protein (1). Cloning sites are available for producing fusion proteins also containing cleavable His•Tag® and S•Tag™ sequences for detection and purification. Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circle map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single-stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore, single-stranded sequencing should be performed using the T7 terminator primer.

质粒图谱pET-32a.png

pET-32a1.png 

 

pET-32a大肠表达质粒使用说明:

    

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;

     4、42℃热激90s,再冰浴2min;

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;

     6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;

     8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。

 

pET-32a大肠表达质粒注意事项

 

      1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。

 





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