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pGEX-4T-1大肠表达质粒
基本信息
别名: pGEX4T-1,pGEX4T1
启动子: Tac/laco promoter
复制子: ColE1 ori
质粒分类: 大肠杆菌载体;pGEX系列表达质粒
质粒大小: 4969bp
质粒标签: N-GST, N-thrombin
原核抗性: 氨苄青霉素Amp
克隆菌株: 大肠杆菌DH5α
培养条件: 37℃,有氧,LB
表达宿主: 大肠杆菌BL21 DE3
培养条件: 37℃,有氧,LB
诱导方式: IPTG或乳糖及其类似物
5'测序引物: pGEX5: GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG
3'测序引物: pGEX3: CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG
备注: 可用GST亲和柱纯化重组蛋白
质粒简介
pGEX-4T-1质粒是一个大肠杆菌表达载体,Tac强启动子可以驱动GST促溶标签和目的基因融合表达,LacI阻碍蛋白和Laco操作子使本质粒在没有加入IPTG之前禁止表达,防止其影响细菌生长。表达后的融合蛋白可用凝血酶蛋白酶切割,再过一次GST柱子即可清除掉GST标签。
质粒图谱
pGEX-4T-1大肠表达质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pGEX-4T-1大肠表达质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。