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pBluescript II-SK(+)噬菌体展示质粒
基本信息
别名: pBluescript II-SK(+)
复制子: pUC ori,F1 ori
质粒分类: 大肠杆菌载体;克隆质粒
质粒大小: 2961bp
质粒标签: LacZ
原核抗性: 氨苄青霉素Amp(100μg/ml)
克隆菌株: DH5α等大肠杆菌
培养条件: 37℃,有氧,LB
5'测序引物: T7(TAATACGACTCACTATAGGG)
3'测序引物: T3(ATTAACCCTCACTAAAGGGA)
备注: 蓝白斑筛选,产生单链DNA
质粒简介
pBluescript II-SK(+)是大肠杆菌原核质粒。为克隆载体,其来源于噬菌体。该载体常被用在克隆和测序过程中,包括DNA测序中,嵌套缺失的构建;体外RNA转录,定点突变和基因定位。pBluescript II-SK(+)带有21个独特限制性内切酶的识别位点。在MCS区两侧是T7和T3 RNA聚合酶启动子序列,其主要帮助RNA的体外合成。pBluescript II SK(+)和 pBluescript II KS(+) 差异仅仅存在于多克隆位点的方向不同。
Standard cloning vector (phagemid excised from lambda ZAPII). The f1 (+) orientation allows rescue of sense strand ssDNA. pBluescript II KS(+) and pBluescript II SK(+) differ by the orientation of the MCS.
质粒图谱
pBluescript II-SK(+)噬菌体展示质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pBluescript II-SK(+)噬菌体展示质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。