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获取电话pE-mMLV转录酶基因克隆质粒(非全长)
基本信息
复制子: pUC ori,f1 ori
原核抗性: 卡那霉素Kanamycin
克隆菌株: 大肠杆菌DH5α
培养条件: 37℃，有氧，LB
5'测序引物: T7:TAATACGACTCACTATAGGG
3'测序引物: T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG
质粒简介
pE-mMLV非全长质粒，非表达质粒，具体的请参考测序报告，可以参考NCBI的序列是：AF033811.1
质粒图谱
pE-mMLV转录酶基因克隆质粒(非全长)使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pE-mMLV转录酶基因克隆质粒(非全长)注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
