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获取电话pLKO-p53-shRNA-941人源基因干扰质粒
基本信息
启动子: U6 promoter
复制子: pUC ori,F1 ori,SV40 ori
终止子: cPPT/CTS , 3
质粒分类: RNA文库质粒；RNA人源质粒；shRNA人源质粒
质粒大小: 7083bp
原核抗性: Amp（100μg/ml）
筛选标记: Puro
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37℃，LB，有氧
表达宿主: 293T等哺乳细胞
培养条件: 37℃，5%CO2
诱导方式: 无需诱导
5'测序引物: U6-F（ATGGACTATCATATGCTTACCGTA）
3'测序引物: pLKO-R（CTGCACTGTACCCCCCAATC）
备注: P53序列：NM_000546。 P53-shRNA-941序列：CCGGCACCATCCACTACAACTACATCTCGAGAT GTAGTTGTAGTGGATGGTGTTTTT
质粒简介
pLKO-p53-shRNA-941质粒是在pLKO.1-Puro载体上克隆了一段shRNA序列得到的一个哺乳细胞慢病毒RNA干扰质粒。U6启动P53shRNA-941的转录，可特异性的干扰P53蛋白的表达。该质粒可作为普通过表达质粒直接转染哺乳细胞，也可包装成慢病毒侵染细胞。质粒本身带有Puro筛选标记，可用嘌呤霉素筛选转染后的细胞得到阳性克隆。
质粒图谱
pLKO-p53-shRNA-941人源基因干扰质粒使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pLKO-p53-shRNA-941人源基因干扰质粒注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
