找不到产品?留下需求帮您找
一键询价HRMVPCS 永生化人视网膜周细胞 QCH791
一周
3500¥
L363 人多发性骨髓瘤细胞 QCH792
一周
4000¥
Colo680N 人食管鳞癌细胞 QCH793
一周
4000¥
hTERT ipNF95.6 人纵状神经纤维瘤细胞 QCH794
一周
8500¥
MDA-PCA-2B 人前列腺癌细胞 QCH795
一周
4500¥
CORL23 人肺癌细胞(大细胞肺1癌)QCH796
一周
3500¥
T3M-4 人胰腺腺癌细胞 QCH797
一周
4500¥
CAL12T 人非小细胞肺癌细胞 QCH798
一周
3500¥
KMS-12-PE 人多发性骨髓瘤细胞 QCH799
一周
4000¥
EFO-27 人卵巢腺癌细胞 QCH800
钦诚生物 | 一周
4000¥
酿酒酵母EBY100菌种
英文名称:Saccharomyces cerevisiae EBY100
运输:低温
保存:-80度
有效期:3年
货期:现货
其他:
产品介绍:
EBY100 是酿酒酵母菌株,属于真核细胞,具有氨苄和卡那霉素抗性。 质粒转化条件为电转化,应用于酵母表面展示。此菌株必须生长在营养丰富的 培养基中,例如 YPD 培养基,无法在 minimal media 中生长。在 GAL1 启 动子的作用下,此菌株能够表达 AGA1 基因。EBY100 的配套载体是 pYD1 载体。此菌株的基因型如下:MATα ura3-52 trp1 leu2?1 his3?200 pep4::HIS3 prb1?1.6R can1 GAL (pIU211: URA3)。
运输及保存 低温运输,-80℃保存,有效期一年。
自备试剂 YPD 培养基、山梨醇、超纯水等
使用方法
质粒转化酿酒酵母EBY100菌种的方法有很多,如电转化、化学转化等。根据实验方法的不同,用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方
法。
1. 挑取酵母单菌落,接种至含有 5 mL YPD 培养基的 50 mL 三角瓶中,
30℃,250-300 r/min 培养过夜;
2. 取 100-500 μL (≤1:100)的培养物接种至含有 50 mL 新鲜培养基的
200 mL 三角摇瓶中,28~30℃,250-300 r/min 培养过夜(约 20 小时),
至 OD600 达到 1.3~1.5;
3. 将细胞培养物于 4℃,1500g 离心 5 分钟,用 50 mL 的冰预冷的无菌水
将菌体沉淀重悬;
4. 按步骤 3 离心,用 25 mL 的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬;
5. 按步骤 3 离心,用 2-5 mL,1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬;
6. 按步骤 3 离心,用 160 μL 的冰预冷的 1M 的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬,
其终体积约为 240 uL;
7. 将 5~20 μg 的线性化 DNA 溶解在 5~10 μL TE 溶液中,与 80 μL 的上
述步骤 6 所得的菌体混匀,转至 0.2 cm 冰预冷的电转化杯中;
8. 将电转化杯冰浴 5 分钟;
9. 根据电转化仪提供的资料,参考其他文献及多次摸索,确定合适的电压、
电流、电容等参数,按优化的参数,进行电击(推荐:电压 1.5 kV ;电
容 25 μF ;电阻 200 Ω;电击时间为 4 ~10 msec)。
10. 电击完毕后,马上加入 1 mL 1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体混匀,转
至 1.5 mL 的 EP 管中,置于 30℃摇床低速培养 1 小时;
11. 将菌体悬液涂布于 MD 平板上,每 200~600 μL 涂布一块平板;
12. 将平板置于 30℃倒置培养,直至单个菌落出现(3-4 天)。