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获取电话大肠杆菌MDS42菌种
英文名称：E.coli MDS42 Strain
运输：低温
保存：-80度
有效期：3年
货期：现货
其他：
产品介绍：
大肠杆菌 MSD42 表示 Multiple-deltion Series 42 号菌，它是用合成生
物学的方法，将属于 E.coli K-12 系的野生型 MG1655 菌株的非必需基因（如
IS、原噬菌体、假基因）、重组相关基因、转座相关基因、潜在毒力基因等进
行缩减，同时保留细菌生长和蛋白表达基因而得，它具有下列特点：
1. 故其基因组比野生型的大肠杆菌小 14.3%，少 663,316 个碱基，但仍然
能够在培养基上生长。
2. 其电转效率比正常大小的 E.coli 更高、极端条件下基因组更稳定，蛋白表
质粒更稳定。
3. 其关键基因型是 F-, ?-,recA1819,lacZM15,?flg,?fhuACDB,另外缺失
699 个基因（包括所有 IS 因子和原噬菌体）。缺失 fhuACDB 导致抗 T1
噬菌体感染，携带 lacZM15 可以进行蓝白斑筛选。详细基因型见下。
4. 本菌种没有任何抗菌素抗性
运输及保存 低温运输，-80℃保存，有效期一年。
自备试剂 YPD 培养基、山梨醇、超纯水等
使用方法
质粒转化大肠杆菌MDS42菌种的方法有很多，如电转化、化学转化等。
根据实验方法的不同，用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方
法。
1. 挑取酵母单菌落，接种至含有 5 mL YPD 培养基的 50 mL 三角瓶中，
30℃，250-300 r/min 培养过夜；
2. 取 100-500 μL （≤1:100）的培养物接种至含有 50 mL 新鲜培养基的
200 mL 三角摇瓶中，28~30℃，250-300 r/min 培养过夜(约 20 小时)，
至 OD600 达到 1.3~1.5；
3. 将细胞培养物于 4℃，1500g 离心 5 分钟，用 50 mL 的冰预冷的无菌水
将菌体沉淀重悬；
4. 按步骤 3 离心，用 25 mL 的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬；
5. 按步骤 3 离心，用 2-5 mL，1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬；
6. 按步骤 3 离心，用 160 μL 的冰预冷的 1M 的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬，
其终体积约为 240 uL；
7. 将 5~20 μg 的线性化 DNA 溶解在 5~10 μL TE 溶液中，与 80 μL 的上
述步骤 6 所得的菌体混匀，转至 0.2 cm 冰预冷的电转化杯中；
8. 将电转化杯冰浴 5 分钟；
9. 根据电转化仪提供的资料，参考其他文献及多次摸索，确定合适的电压、
电流、电容等参数，按优化的参数，进行电击（推荐：电压 1.5 kV ；电
容 25 μF ；电阻 200 Ω；电击时间为 4 ～10 msec）。
10. 电击完毕后，马上加入 1 mL 1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体混匀，转
至 1.5 mL 的 EP 管中，置于 30℃摇床低速培养 1 小时；
11. 将菌体悬液涂布于 MD 平板上，每 200~600 μL 涂布一块平板；
12. 将平板置于 30℃倒置培养，直至单个菌落出现（3-4 天）。
