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获取电话大肠杆菌ET12567(pUZ8002)菌种
英文名称：ET12567(pUZ8002) E.coli Strain
运输：常温
保存：-80度
有效期：3年
货期：现货
其他：
产品介绍：
大肠杆菌 ET12567(pUZ8002)主要用来进行链霉菌基因操作，是链霉菌
基因敲除或者基因倍增通用的菌株。此细菌有下列特点：
1. 携带 pUZ8002 质粒，此质粒的 tra 基因编码转移蛋白 Tra，使得质粒
DNA 能从大肠杆菌转移到链霉菌。
2. 是甲基化缺陷型，故其转移的质粒 DNA 不会被大部分有甲基修饰系统的
链霉菌降解。如果链霉菌受体菌不含甲基化修饰系统，则也可以使用
DH5a(pUZ8002)菌作为供体菌。
3. 培养时需要加入 25 μg/mL 氯霉素和 25 μg/mL 卡那霉素以维持细胞内
pUZ8002 伴侣质粒的存在。
4. 跟 ET12567(pUZ8002)兼容的质粒是 pSET152 和 pKC1139。
运输及保存 低温运输，-80℃保存，有效期一年。
自备试剂 YPD 培养基、山梨醇、超纯水等
使用方法
质粒转化大肠杆菌ET12567(pUZ8002)菌种的方法有很多，如电转化、化学转化等。
根据实验方法的不同，用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方
法。
1. 挑取酵母单菌落，接种至含有 5 mL YPD 培养基的 50 mL 三角瓶中，
30℃，250-300 r/min 培养过夜；
2. 取 100-500 μL （≤1:100）的培养物接种至含有 50 mL 新鲜培养基的
200 mL 三角摇瓶中，28~30℃，250-300 r/min 培养过夜(约 20 小时)，
至 OD600 达到 1.3~1.5；
3. 将细胞培养物于 4℃，1500g 离心 5 分钟，用 50 mL 的冰预冷的无菌水
将菌体沉淀重悬；
4. 按步骤 3 离心，用 25 mL 的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬；
5. 按步骤 3 离心，用 2-5 mL，1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬；
6. 按步骤 3 离心，用 160 μL 的冰预冷的 1M 的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬，
其终体积约为 240 uL；
7. 将 5~20 μg 的线性化 DNA 溶解在 5~10 μL TE 溶液中，与 80 μL 的上
述步骤 6 所得的菌体混匀，转至 0.2 cm 冰预冷的电转化杯中；
8. 将电转化杯冰浴 5 分钟；
9. 根据电转化仪提供的资料，参考其他文献及多次摸索，确定合适的电压、
电流、电容等参数，按优化的参数，进行电击（推荐：电压 1.5 kV ；电
容 25 μF ；电阻 200 Ω；电击时间为 4 ～10 msec）。
10. 电击完毕后，马上加入 1 mL 1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体混匀，转
至 1.5 mL 的 EP 管中，置于 30℃摇床低速培养 1 小时；
11. 将菌体悬液涂布于 MD 平板上，每 200~600 μL 涂布一块平板；
12. 将平板置于 30℃倒置培养，直至单个菌落出现（3-4 天）。
