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获取电话大肠杆菌BL21-CodonPlus-RP菌种
英文名称：E.coli BL21-CodonPlus-RP Strain
运输：低温
保存：-80度
有效期：3年
货期：现货
其他：
产品介绍：
BL21-CodonPlus-RP 菌株专门用于表达富含 GC 的基因，它有下列特点:
1. 携带 pACYC-RP 质粒，质粒上面有 2 种 tRNA 基因，可以克服大肠杆菌
在表达富含 GC 的基因的菌种时候，自身的相关稀有密码子不够而影响产
量的问题。
2. 缺失 lon 和 ompT 两个蛋白酶基因，有利于外源蛋白的纯化。
3. EcoB 系统 Eco 位点识别能力缺失，导致 EcoB 甲基化修饰和限制功能均
失，甲基化和非甲基化质粒均可转入本菌种。
4. Dcm 甲基化系统完整，制备的质粒是甲基化的。
5. 内源核酸酶缺失，外源 DNA 稳定。
6. 具有氯霉素和四环素抗性
运输及保存 低温运输，-80℃保存，有效期一年。
自备试剂 YPD 培养基、山梨醇、超纯水等
使用方法
质粒转化大肠杆菌BL21-CodonPlus-RP菌种的方法有很多，如电转化、化学转化等。
根据实验方法的不同，用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方
法。
1. 挑取酵母单菌落，接种至含有 5 mL YPD 培养基的 50 mL 三角瓶中，
30℃，250-300 r/min 培养过夜；
2. 取 100-500 μL （≤1:100）的培养物接种至含有 50 mL 新鲜培养基的
200 mL 三角摇瓶中，28~30℃，250-300 r/min 培养过夜(约 20 小时)，
至 OD600 达到 1.3~1.5；
3. 将细胞培养物于 4℃，1500g 离心 5 分钟，用 50 mL 的冰预冷的无菌水
将菌体沉淀重悬；
4. 按步骤 3 离心，用 25 mL 的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬；
5. 按步骤 3 离心，用 2-5 mL，1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬；
6. 按步骤 3 离心，用 160 μL 的冰预冷的 1M 的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬，
其终体积约为 240 uL；
7. 将 5~20 μg 的线性化 DNA 溶解在 5~10 μL TE 溶液中，与 80 μL 的上
述步骤 6 所得的菌体混匀，转至 0.2 cm 冰预冷的电转化杯中；
8. 将电转化杯冰浴 5 分钟；
9. 根据电转化仪提供的资料，参考其他文献及多次摸索，确定合适的电压、
电流、电容等参数，按优化的参数，进行电击（推荐：电压 1.5 kV ；电
容 25 μF ；电阻 200 Ω；电击时间为 4 ～10 msec）。
10. 电击完毕后，马上加入 1 mL 1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体混匀，转
至 1.5 mL 的 EP 管中，置于 30℃摇床低速培养 1 小时；
11. 将菌体悬液涂布于 MD 平板上，每 200~600 μL 涂布一块平板；
12. 将平板置于 30℃倒置培养，直至单个菌落出现（3-4 天）。
