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毕赤酵母X33菌种
英文名称:
运输:低温
保存:-80度
有效期:3年
货期:现货
其他:
X-33 是毕赤酵母菌株,属于真核细胞。其适宜的生长温度是 28 至 30
度,温度超过 32 度对蛋白的表达是有害的,并可能导致细胞的死亡。X-33 毕
赤酵母可以在 YPD 培养基中生长。X-33 毕赤酵母可用来表达外源蛋白,可用
的载体有 pPICZ A,B,C 系列。X33 毕赤酵母含有 AOX1 基因,因此可以用甲
醇来诱导外源基因的表达。其基因型是 Mut+。X33 毕赤酵母不受针对原核生
物的抗生素例如卡那和氨苄抑制,因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培
养菌株污染,往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素,来抑制细
菌菌的污染和生长。
质粒转化毕赤酵母X33菌种的方法有很多,如电转化、化学转化等。
根据实验方法的不同,用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方
法。
1. 挑取酵母单菌落,接种至含有 5 mL YPD 培养基的 50 mL 三角瓶中,
30℃,250-300 r/min 培养过夜;
2. 取 100-500 μL (≤1:100)的培养物接种至含有 50 mL 新鲜培养基的
200 mL 三角摇瓶中,28~30℃,250-300 r/min 培养过夜(约 20 小时),
至 OD600 达到 1.3~1.5;
3. 将细胞培养物于 4℃,1500g 离心 5 分钟,用 50 mL 的冰预冷的无菌水
将菌体沉淀重悬;
4. 按步骤 3 离心,用 25 mL 的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬;
5. 按步骤 3 离心,用 2-5 mL,1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬;
6. 按步骤 3 离心,用 160 μL 的冰预冷的 1M 的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬,
其终体积约为 240 uL;
7. 将 5~20 μg 的线性化 DNA 溶解在 5~10 μL TE 溶液中,与 80 μL 的上
述步骤 6 所得的菌体混匀,转至 0.2 cm 冰预冷的电转化杯中;
8. 将电转化杯冰浴 5 分钟;
9. 根据电转化仪提供的资料,参考其他文献及多次摸索,确定合适的电压、
电流、电容等参数,按优化的参数,进行电击(推荐:电压 1.5 kV ;电
容 25 μF ;电阻 200 Ω;电击时间为 4 ~10 msec)。
10. 电击完毕后,马上加入 1 mL 1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体混匀,转
至 1.5 mL 的 EP 管中,置于 30℃摇床低速培养 1 小时;
11. 将菌体悬液涂布于 MD 平板上,每 200~600 μL 涂布一块平板;
12. 将平板置于 30℃倒置培养,直至单个菌落出现(3-4 天)。