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动物胞浆蛋白微量制备试剂盒

动物胞浆蛋白微量制备试剂盒

价格: 290

品牌:钦诚生物

供货周期: 现货

货号:QC91203-30

规格:30次

动物胞浆蛋白微量制备试剂盒

英文名称:One-Step Cytoplasmic Protein Miniprep Kit

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:1-2天

其他:


产品介绍:

微量制备动物胞浆蛋白

产品及特点 

DNA 只存在于细胞核内,因此参与转录调节和 DNA 复制的蛋白质主要存在于

细胞核中,要研究蛋白质与 DNA 的相互作用,首先需要制备能够与 DNA 作用的

天然细胞核蛋白质。目前、细胞核蛋白质制备方法一般都比较繁琐,一次处理大量

样品时尤其不便,为此本公司开发了本产品,用于从哺乳动物组织和培养细胞核蛋

白的微量提取,它具有下列特点:

1. 提取制备过程简便,只需要一小时。

2. 实验重复性好,尤其适合同时处理多个样品。

3. 可用于培养的动物细胞,也可以用于组织细胞。

4. 制备的核蛋白能保持天然活性,可以直接用于转录因子活性分析、凝胶阻滞实

验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、DNA 足迹图实验和甲

基化干扰实验酶活性测定等研究。

运输及保存 低温运输,4℃保存,有效期一年。

自备试剂 PBS 缓冲液,PMSF 溶液,DTT 溶液

使用方法 1、 对贴壁细胞:将 5×10

5-7 个细胞培养到覆盖率为 55-65%,吸弃培养基,用

自备的预冷 PBS 缓冲液洗涤细胞一次,将细胞从壁上小心刮下,转移到预冷

的塑料离心管中,4℃ 3000 rpm 离心 5 分钟,小心弃上清。直接进入第三

步进行后续处理。

2、 对悬浮细胞:直接将 5×105-7 个的悬浮细胞转移到 1.5 mL 预冷的塑料离心管

中,4℃ 3000 rpm 离心 5 分钟,用自备的预冷的 PBS 洗涤细胞沉淀一次,

3000 rpm 离心 5 分钟,小心弃上清。直接进入第三步处理细胞沉淀。说明:

悬浮细胞制备胞浆的效果一般好于贴壁细胞。

3、 在细胞沉淀中加入相当于沉淀细胞体积 5 倍或更多的预冷的溶液 A 重悬细胞,

一般不超过 300 uL-500 uL 溶液 A。溶液 A 在临用前最好加入终浓度为 0.2

mM 的 PMSF 和 1mM 的 DTT。PMSF 和 DTT 在水溶液中都不稳定,只能

临用提加入。

4、 冰浴静置 10 分钟。

5、 将细胞转移到预冷的 15 mL 的 Dounce 或 Potter 玻璃匀浆器中(温和破裂细

胞用),上下匀浆 10-15 次(为检查效果,可取少量裂解物与自备的 0.01%

Trypan Blue 溶液混合,在显微镜下观察,只有破裂细胞的细胞核才能染色,

完整细胞无色。如果需要,可增加匀浆次数直到 80-90%以上的细胞裂解为

止 )。

6、 小心转移到预冷的离心管中,4℃ 17000g 离心 15 分钟,线粒体,细胞核等

细胞器将沉淀到管底。保留上清(胞浆部分)待用。






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