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RIPA裂解液(强)

RIPA裂解液(强)

价格: 450

品牌:钦诚生物

供货周期: 现货

货号:QC131006-250

规格:250ml

RIPA裂解液(强)

英文名称:

运输:低温

保存:负20℃

有效期:1年

货期:1-2天

其他:


产品介绍:

RIPA裂解液(强)

产品及特点

 RIPA(Radio Immunoprecipitation Assay)裂解液是一种传统的细胞组织

快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 等实

验。本产品裂解强度较强,对膜蛋白、胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种

转录因子均有很好的效果,本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂,能有效防

止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。我公司各种 RIPA 裂解液产品特点见下表:

产品名称 RIPA 裂解液

(强)

RIPA 裂解液

(中)

RIPA 裂解液

(弱)

裂解强度 强 中 温和

对膜蛋白的提取 很好 较好 一般

对胞浆蛋白的提取 很好 很好 很好

对核蛋白的提取 很好 较好 较好

胞浆磷酸化蛋白提取 很好 很好 很好

细胞核转录因子提取 很好 很好 很好

含蛋白酶抑制剂 是 是 是

含磷酸酯酶抑制剂 是 是 是

主要用途 WB, IP WB, IP WB, IP, co-IP


运输及保存 低温运输,4℃保存,有效期一年。

自备试剂 PMSF

使用方法 对于培养细胞样品:

1. 融解 RIPA 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,

使 PMSF 的最终浓度为 1mM。

2. 裂解细胞

2.1 对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血

清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比

例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2

秒后,细胞就会被裂解。

2.2 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞

加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分

裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,

然后再裂解。

3. 充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、

Western 和免疫沉淀等操作。

注意:通常 6 孔板每孔细胞加入 150 微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高

可以适当加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。

对于组织样品:

1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解 RIPA 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,

使 PMSF 的最终浓度为 1mM。

3. 按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不

充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解

液的用量。)

4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

5. 充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、

Western 和免疫沉淀等操作。

6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈

vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是

比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注:RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明

胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋

白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别

紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后

续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如 NF-kappaB、p53 等时,通常不必

进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。

备注

1. 为取得的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。

3. 用 RIPA 裂解液裂解得到的蛋白样品,建议使用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒,不

建议使用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。






生化试剂 RIPA裂解液(强)由上海钦诚生物科技有限公司为您提供,如想了解更多关于生物分子 RIPA裂解液(强)的报价、规格、厂家等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应RIPA裂解液(强)外,上海钦诚生物科技有限公司还可为您提供: CCFSTTG1 人脑星形细胞瘤 QCH828、 MM28 人眼葡萄膜黑色瘤細胞 QCH829、 HCC202 人乳腺原发性导管癌 QCH830
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