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获取电话DNA快速连接试剂盒
英文名称：Rapid DNA Ligation Kit
运输：低温
保存：负20度
有效期：1年
货期：1-2天
其他：
产品介绍：
产品及特点
DNA 连接反应通过 T4 连接酶催化双链 DNA 的 3'-OH 和 5'-P 形成磷
酸二脂键而将 DNA共价连接在一起。被连接的 DNA末端可以是粘末端（例
如限制性切割 EcoR I 产生的末端），也可以是平末端（限制性切割 Sma I
产生的末端）。Pheiffer 等人发现 PEG 可以促进 T4 DNA 连接酶催化的
连接反应[NAR, 11, 7853-7871, 1983]，连接反应只需十分钟即可完成。
本产品就是根据这一原理设计，其特点如下：
1. 超快，整个连接反应只需要室温 5 分钟左右，反应液可以直接用于转
化实验。
2. 高效，溶液配方经过优化，每 ug 插入 DNA 连接转化得到的重组子可
达 107 左右。
3. 既可用于平末端连接，也可用于粘末端连接，包括 PCR 产物与 T 载
体的连接。
4. 简单，客户只需要提供载体和插入片段即可。
运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法 一: 连接反应
1. 在无菌的离心管中严格按下表顺序加入列各成分（以 10 uL 体系为
例）:
成分 阴性对照管 样品管
溶液 A 5 uL 5 uL
插入片段（自备） - 0.2-0.5 ug(注)
载体（自备） 50 ng 50 ng
无菌水 补水到 9 uL 补水到 9 uL
注: 插入 DNA 片段的摩尔数最好是载体的 3-10 倍，如果载体长度
为 3000bp，则所需插入 DNA 片段折合成重量(ng) ＝ (插入 DNA
片段 bp 数×50 ng×N)÷3000 bp。N 就是自己选定的插入 DNA
片段与载体的摩尔比。
2. 最后在每管中加入 1 uL 溶液 B，轻柔吹打混合均匀后用微量离心机
将液体全部甩到管底。
3. 室温放置至少 5 分钟，最长可以放置过夜。
4. 70℃保温 10 分钟。此步可以灭活有关的酶，否则转化效率有所降低。
5. 根据使用的转化方法，每管各取适量用于转化实验，余下的放置在
-20℃保存。
二：细菌转化及筛选（仅供参考，本产品不提供相关试剂）
6. 将 100 μL 转化效率在 1×108 cfu/μg 以上的感受态细胞于冰上解
冻。
7. 取 5-10 μL 连接产物加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀。
8. 在冰上放置 30 分钟。
9. 将离心管放 42℃热休克 90 秒，然后快速将其转移到冰浴中放置 1~2
分钟。
10. 每管中加 900 μL LB 培养基，37℃振荡培养 1 小时复苏细胞。
11. 将 100 uL 复苏涂布到含 Amp 的 LB 琼脂平板上（根据载体情况也
可能需要加上 X-gal 和 IPTG）。
12. 室温 4,000 rpm 离心剩余的 900 uL 复苏细胞 5 分钟，弃去 800 μ
L 上清，用剩余 100 μL 培养基重悬细胞并涂布到含 Amp 的 LB 琼脂
平板上（可加 X-gal、IPTG）。
13. 将平板置于室温直至液体被吸收。此步非常重要，否则培养板将在
37℃排除水分，细菌将随水在培养基上到处游动，不能形成单个菌落。
14. 倒置平皿，于 37℃培养，12~16 小时后可出现菌落。一般情况下阳
性对照组会有上千个菌落（100 uL 转化液产生的菌落数×10），自 联
对照只有少数几个菌落，样品组的菌落数取决于 PCR 回收片段的质
量。
15. 按常规方法筛选重组子。
