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获取电话即用型蓝白T载体A型（T7-SP6，有MCS）
英文名称：
运输：低温
保存：负20度
有效期：1年
货期：1-2天
其他：
产品及特点
本产品是用Xcm I酶切环状的可保种型蓝白T载体去掉一段1.3Kb
的插入片段后得到的线性DNA片段(载体部分)，其两个末端的5’都有一个突出的T，
可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片
段。
1. 由于是通过Xcm I酶切制备，所以载体两端的带T率为100%，远高于用Taq
DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2. 克隆的阳性率一般在90%以上, 缩短了筛选过程。
3. 插入位点两侧有对称的常见酶切位点（如EcoR I），便于对克隆的PCR片段
进行近一步的分析。
4. 克隆位点两侧分别有T7和T3 RNA聚合酶启动子, 便于用克隆的PCR片段制
备RNA探针。
5. 可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
6. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
7. 含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。
运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期两年。
自备试剂 连接反应试剂，超纯水
使用方法 一. PCR产物的纯化和定量
1. 将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分离。不要使用TBE缓冲液，因为它会
影响DNA的胶回收效率。
2. 在长波(360nm)紫外灯下快速切胶，尽可能切掉多余的凝胶。为避免嘧啶二
聚体的形成，可以使用天泽基因的DNA防护剂UV Eraso。
3. 用天泽基因的柱式DNABACK纯化回收PCR片段。溶解PCR
片段的超纯水体积越小越便于后续操作。
4. 将回收的片段与浓度已知的DNA Marker在含EB或绿如蓝
染料的琼脂糖凝胶中电泳，通过比较DNA条带的荧光强度
而估测PCR纯化产物的浓度。注意：一般不推荐使用测OD260的方法，因
为回收的DNA很珍贵，该方法需要比较多的DNA。
5. 如果所得的DNA片段浓度较低，可以使用本公司核酸浓缩剂将其浓缩到需要的浓度。
6. 如果PCR片段为平末端，则需要用加A试剂盒处理，否则不能用于与T载体的
连接反应。
二. 连接反应
1. 短暂离心装有T载体的离心管。
2. 在两个离心管中加入下列成分：
成份 样品管 负对照 正对照
自备 T4 Ligase Buffer，10× 1 uL 1 uL 1 uL
蓝白 T 载体(40 ng/uL) 1 uL 1 uL 1 uL
自备 PCR 纯化产物 （见下注） 不加 不加
阳性对照(40 ng/uL) 不加 不加 1 uL
自备 T4 Ligase(5-10 U/uL) 1 uL 1 uL 1 uL
补超纯水到 10 uL 10 uL 10 uL
注: PCR纯化产物与蓝白T载体的摩尔比为3-10，可以按下面的公式计算出
连接反应中需要的PCR 纯化产物的ng数:
加入载体的量(
ng) 插入片段大小(kb)
载体大小(kb) 插入片段和载体摩尔比
假如插入片段和载体的连接比例设定为3，连接反应中加入蓝白T载体(长度为3 Kb)
的量为40ng，则需要长度为0.5 Kb 的PCR 纯化产物的量是:
40 ng载体 0.5 kb插入片段
3
3.0 kb载体 20 ng插入片段
3. 用移液器吹打连接反应使之混匀后，16℃孵育12小时(或按T4 Ligase供货商
提供的操作手册进行连接)。
