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获取电话一管式双链cDNA合成试剂盒
英文名称：One-Tube ds-cDNA Synthesis Kit
运输：低温
保存：负20℃
有效期：1年
货期：1-2天
其他：
产品介绍：
从RNA直接合成双链cDNA
产品及特点
本产品是用于一管式双链 cDNA 合成的试剂盒。cDNA 第一链合成的原理
是以 Oligo dT 为通用引物的、MMLV 催化的逆转录反应。其原理如下：
cDNA 第二链合成的原理是用 RNase H 使 RNA-DNA 杂合链中的 RNA
产生切口，再用 DNA Polymerase I 通过切口平移(nick translation)反应进
行 RNA 链取代合成 cDNA 第二链，其原理图如下：
本产品具有下列特点：
1. 即开即用，含有合成两条 cDNA 链的所有试剂。
2. 一管式进行，第一链 cDNA 合成后不需要任何处理，直接进入第二链
的合成。
3. 所得双链 cDNA 可以直接用于后续的常规 PCR、real-time PCR、
cDNA 文库构建、抑制性差减杂交等。
4. 本试剂盒足够 10 次 80uL 体系的双链 cDNA 合成反应。
运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂 mRNA 提取试剂盒
使用方法 一：mRNA 的制备
本试剂盒不提供 mRNA 提取试剂，用户需自备相关试剂。
二：双链 cDNA 的合成
1. 在一个干净的塑料离心管中，按下表设置 cDNA 合成反应：
成分 用量
自备样品 mRNA 4 uL（0.5-2ug）
Oligo dT 引物（0.5ug/uL） 1 uL
70℃ 2 分钟后室温放置 2 分钟，短暂离心
cDNA 一链合成缓冲液 4 uL
MMLV 逆转录酶 1 uL
轻柔吹打混匀后 42℃保温 90 分钟合成第一链 cDNA
超纯水 48 uL
5×cDNA 二链合成缓冲液 16 uL
20×cDNA 二链合成酶混合液 4 uL
轻柔吹打混匀后，短暂离心，16℃保温 2 小时
如果需要将双链 cDNA 平末端化，则需加自备 T4 DNA 聚合酶
2 uL，轻柔吹打混匀后，16℃继续保温 30 分钟。如果不需要将
cDNA 平末端化，则直接进入下一步。
0.2M EDTA 溶液 4 uL
2. 电泳 5uL 检测 cDNA 质量。如果 cDNA 在 0.5-10Kb 的范围内呈模糊一
片，则 cDNA 合格。如果没看见 cDNA 或有其他异常，需查找原因后再
继续。
3. 所得 cDNA 可以直接用于后续的常规 PCR、real-time PCR、cDNA 文
库构建、抑制性差减杂交等实验。
