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丝状真菌线粒体DNA提取试剂盒

丝状真菌线粒体DNA提取试剂盒

价格： ￥ 2490

品牌：钦诚生物

供货周期： 现货

货号：QC130831-15

规格：15次

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丝状真菌线粒体DNA提取试剂盒

英文名称：Filamentous Fungal Mitochondrial DNAout

运输：常温

保存：常温

有效期：1年

货期：1-2天

其他：


产品介绍：

提取真菌线粒体的DNA

产品及特点

 线粒体是重要的、负责能量产生的极其重要的细胞器。对丝状真菌线粒体进行生

化，遗传和分子生物学研究都需要先进行线粒体纯化。本产品就是基于密度梯度离心

的，专门用于从丝状真菌叶片中纯化完整线粒体、再从中纯化线粒体 DNA 的试剂盒。

它具有下列特点：

1. 即用型试剂盒，用户不需要单独配制各种溶液。

2. 所得线粒体可用于后续的 SDS-PAGE、Western、ELSIA、蛋白组分析、线粒

体 DNA 和线粒体 RNA 纯化。

3. 本产品足够 15 次线粒体纯化和 15 次线粒体 DNA 提取，每次可处理 10-20g 菌

丝体，能得到 1-5 mg 左右线粒体。

4. 已经成功用于 Aspergillus candidus、Aspergillus nidulans、Magnaporthe

oryzae 、 Neurospora crassa 、 Penicillium chrysogenum 、 Rhizopus

stononifer 等丝状真菌。


运输及保存 常温运输和保存, 保存期限一年。

自备试剂 去离子水、氯仿、异丙醇、75%乙醇、TE。

使用方法 注意：纯化 DNA 提取用的线粒体的要求比纯化功能研究用的线粒体的要求要低，但

整个操作还是在冰上或者在冷室进行，所用器皿和溶液在 4℃预冷，离心要在 4℃进行，离心力以 g 而不是 rpm 计算。

一：菌丝的摇瓶培养

1. 使用合适的丝状真菌培养基，接种孢子至终浓度为 2×10E6/mL。一般 100 mL

液体培养基可以得到 0.8-1.2g 菌丝体，而本方法一次可以处理 10-20g 菌丝体，

故一次培养 1-2 升。

2. 在合适的温度（如 25℃、30℃或 37℃，根据真菌不同而不同）250rpm/min

摇晃培养 16-20 小时。

3. 用多层纱布或多层过滤纸过滤收集菌丝，用冰浴的自备去离子水洗涤菌丝三次去

除残留的培养基。

4. 用吸水纸吸干菌丝的水分，称重后立即使用。如果在-80℃或液氮长期放置，线

粒体回收效率将减低。

二：线粒体粗提液的制备

5. 制备溶液 A 工作液：每次提取需 150mL 溶液 A 工作液，制备方法是将 20mL

溶液 A 和 130mL 自备去离子水混合，冰上预冷即可。

6. 在 200mL 烧杯中，加入 100mL 预冷的溶液 A 工作液，再加入新制备的菌丝体，

然后全部转移到 Waring 匀浆机（家用果汁匀浆机）中，低速匀浆 10 秒，避免

起泡沫。用玻璃棒把菌丝按入匀浆机底部后，再低速匀浆 10 秒。注意：还可以

选择 Dounce 玻璃匀浆器，Polytron 匀浆机和研磨（加玻璃珠）等方法，但它

们单次处理量一般都较小，需多份处理再汇集。

7. 用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液，用预冷的 200 mL 量筒收集穿透液。

8. 将剩下的菌丝体转移到 Waring 匀浆机中，再加入 40 mL 预冷的溶液 A 工作液，

低速匀浆 10 秒，用上步的带柄尼龙滤膜过滤，用预冷的 200 mL 量筒收集穿透

液。注意：带柄尼龙滤膜后可反复使用。

9. 将穿透液分到 4 个预冷的 50 mL 的塑料离心管中（每个约 35 mL）。

10. 在水平转子离心机上 4℃ 4000 g 离心 10 分钟，小心转移上清（含线粒体的部

分）到 4 个新的离心管中。沉淀含细胞核和未裂解的细胞，可以弃之不用。如果

要用于纯化细胞核 DNA，则可以放-80℃长期保留。

11. 将含上清液的 4 个离心管在 4℃ 10000 g 离心 20 分钟。

12. 每个离心管中加 2.5mL 预冷的溶液 A 工作液重悬线粒体沉淀并汇集（共约 10

mL），此为线粒体粗提液。

13. 如果直接用线粒体粗提液提取线粒体 DNA，容易有细胞核 DNA 污染。具体步骤

是：在水平转子离心机上 4℃ 10000 g 离心 7 分钟，小心弃上清，沉淀为线粒

体，直接用于第三步的线粒体 DNA 提取。

14. 如果需要高纯度、无污染的线粒体 DNA，则需要用密度梯度离心法将完整的线

粒体和其他细胞碎片进一步分离。具体见下步线粒体精提液的制备。

三：线粒体精提液的制备（密度梯度离心法）

15. 制备重液和轻液：将 4.1 克成分 B 干粉加到 6.3 mL 溶液 C 中，充分摇晃混匀

得 10 mL 重液。将 4.1 克成分 B 干粉加到 6.3 mL 去离子水中，充分摇晃混匀

得 10mL 轻液。

16. 在 50 mL 塑料离心管中先加入 10 mL 重液，再在其上轻轻加上 10 mL 轻液，

加上第 11 步所得的约 10 mL 线粒体粗提液。

17. 加平衡离心管后在水平转子冷冻超速离心机上 4℃ 43000 g 离心 2 小时，重液

和轻液间的带为完整线粒体。

18. 用广口吸管小心将线粒体转移到新的离心管中，加入等倍体积的预冷的溶液 C，

轻柔混匀。取少量在相差显微镜下检查线粒体完整性。

19. 在水平转子离心机上 4℃ 19000 g 离心 20 分钟，小心将上清吸出后，线粒体沉

淀可以直接用于 DNA 提取。

四：线粒体 DNA 提取

20. 将 600 uL 通用线粒体 DNAout 溶液 A 加入到上步得到的线粒体沉淀中并吹打

混匀，然后转移到 1.5 mL 离心管中。

21. 65℃放置 5 分钟。

22. 加入 300 uL 通用线粒体 DNAout 溶液 B，震荡混匀 10-30 秒。注意：溶液 B

非常粘稠，可以将其预热到 65℃并剪掉一截枪头后再取。

23. 加入 200 uL 自备的氯仿，震荡混匀 10-30 秒。

24. 12,000 g 室温离心 3 分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。

25. 小心转移上清液（约 0.8 mL）到一个新的 1.5 mL 离心管中，避免触及中间层

的白膜，可留少量上清不取。

26. 加入 1 倍体积的自备异丙醇，颠倒 30 次混匀。

27. 12,000 g 室温离心 5 分钟，小心弃上清液。

28. 在离心管中加入 1 mL 自备的 75%乙醇，震荡 30 秒。

29. 12,000 g 室温离心 1 分钟，小心弃上清液。

30. 12,000 g 室温离心半分钟，残留液体将汇集在管底。

31. 用洗液枪吸弃管底残留液（约 50 uL）。

32. 加 50-100 uL 自备的 TE 缓冲液，溶解 DNA 沉淀即得线粒体 DNA 溶液。直接

取 5-10 uL 电泳检测，其余放直接使用或放-80℃冰箱备用。






生化试剂 丝状真菌线粒体DNA提取试剂盒由上海钦诚生物科技有限公司为您提供，如想了解更多关于生物分子 丝状真菌线粒体DNA提取试剂盒的报价、规格、厂家等信息，欢迎来电或留言咨询。除供应丝状真菌线粒体DNA提取试剂盒外，上海钦诚生物科技有限公司还可为您提供： HRMVPCS 永生化人视网膜周细胞 QCH791、 L363 人多发性骨髓瘤细胞 QCH792、 Colo680N 人食管鳞癌细胞 QCH793
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