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柱式冻存血液DNA提取试剂盒
英文名称:Column Frozen Blood DNAOUT
运输:常温
保存:常温
有效期:1年
货期:1-2天
其他:
产品介绍:
提取冷冻的抗凝血的DNA
产品及特点
血液 DNA 是重要的研究材料,但是血液 DNA 在常温下存放的时间很短,
因此很多血液样品都是冻凝存放。由于冻存过程中形成的冰晶会刺破细胞膜,释
放出 DNA,因此从冻存血液中高效提取 DNA 一直是个棘手的问题。本产品就
专门用于从冻存血液中提取 DNA 的试剂盒,它具有下列特点:
1. 适用于各种动物血液,包括禽类和昆虫。
2. 微量提取,每次可处理 400 μL 血液。
3. DNA 完整性好,纯化后长度在 20-50 Kb 之间。
4. DNA 纯净,OD260/OD280 在 1.8-2.0 之间,可直接用于 PCR、酶切、
杂交等实验。DNA 产量一般在 10 μg/mL 血液。
5. 操作简单,整个过程约 20 分钟,室温操作,适合大规模样品处理。
运输及保存 常温运输和保存,有效期一年。
自备试剂 氯仿
使用方法 1. 从-20℃或更低的冰箱中取出血液样品,室温下静置融化。
2. 将 400 μL 解冻的血液转移到一个 1.5 mL 的塑料离心管中,加入 400 μL
溶液 A,充分震荡混匀。如果是禽类血液,则少加 10 倍,只加 40 μL。
3. 在混合液中加入 400 μL 溶液 B 和 200 μL 氯仿(自备),振荡 1 分钟。由
于离心管比较满,所以需要确保管底溶液转动起来,否则只是液面振动而已。
4. 4℃12000 g 离心 10 分钟,小心将上清转移至一新的 1.5 mL 塑料离心管
中。注意:不要室温离心,如果室温离心,则离心后部分样品的中间白
色层可能会很厚,只能得到很少的上清。
5. 将约 0.7-0.8 mL 上清转移到 10-15 mL 塑料离心管中(不要使用玻璃离心
管,否则 DNA 会吸附到管壁上。常用的培养提质粒用的细菌的培养管即可)。
6. 加入 2.5 倍上清体积的溶液 C(2 mL),立即摇晃混匀。
7. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中,每次 0.7 mL 左右,转移后静置 2-5
分钟,以使 DNA 与膜充分结合,然后室温 12000 g 离心 30 秒,弃收集管
中的废液,然后再加入 0.7 mL,重复上述操作,直到全部混合液挂柱。
8. 在离心吸附柱中加入 0.7 mL 通用洗柱液,室温 12000 g 离心 30 秒,弃收
集管中的废液。
9. 在离心吸附柱中再加入 0.3 mL 通用洗柱液,室温 12000 g 离心 30 秒,弃
收集管中的废液。
10. 室温 12000 g 离心 30 秒,去尽残留液体(此步骤十分重要,不要省略,
否则残留的含乙醇的通用洗柱液将抑制后续的酶反应)。
11. 将离心吸附柱置于一新的 1.5 mL 塑料离心管中,加入 50 μL DNA 洗脱液
2.0,室温放置 2 分钟。如果将 DNA 洗脱液 2.0 在 65℃预热后再使用,洗
脱 DNA 的效果更佳。
12. 室温 12000 g 离心 30 秒,离心管底部溶液即 DNA 溶液,可立即使用或
-20℃长期保存。
13. 本产品所用离心吸附柱吸附能力比较强,如果再次用 DNA 洗脱液 2.0 洗脱,
还能洗脱下一些血液 DNA。
疑难解答 Q:保存血液样品时温度越低越好吗?
A: 不是。Tegelstrom 曾经比较了分别在-70℃, -20℃, 4℃保存了 6 个月的蛙
血,发现保存温度越低,血液 DNA 的断裂越严重(详见 Tegelstrom, 1989.
Cold room Storage of blood may be better than storage at -70℃.
Fingerprint News, 4:5-6)。
Q: 本产品是否可以用于放量操作?
A: 可以在大的离心管中进行放量操作,如每次处理 5-100 mL 血液,只是客户
需要单独购买红细胞裂解液,并按比例增加溶液 A 和溶液 B 的用量。
Q: 冷冻血液为何 DNA 产量很低?
A: 冷冻过程中形成的冰晶刺破了细胞膜和细胞核膜,红细胞裂解液处理时释放
的 DNA 将进入上清并丢失,所以后得到的 DNA 是没有被冰晶刺破的细胞
的 DNA。