找不到产品?留下需求帮您找
一键询价赛多利斯 Microsart ATMP DNA提取试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart AMP DNA提取试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart Research 细菌检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart ATMP 细菌检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart Research 支原体检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart® ATMP 支原体检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart 支原体验证标准品(菌株标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart 支原体校准试剂(DNA标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart® 细菌验证标准品(菌株标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart 细菌校准试剂(DNA标准品)
赛多利斯 | 一周
面议
鼻气管炎鸟杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒PCR在分子克隆和DNA分析中有多种用途,下面就向大家介绍PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
3:鼻气管炎鸟杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
PCR实验步骤
典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是:
将待扩增的模板DNA置高温下(通常为93℃-94℃)使其变性解成单链;
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合,两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短;
耐热的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入,以目的基因为模板从5’→3’方向延伸,合成DNA的新互补链。
实验过程:
一、鼻气管炎鸟杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、鼻气管炎鸟杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
相关PCR产品列表:
15-64840 Dengue Virus(DENV)登革病毒4型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 50次
15-64800 Dengue Virus(DENV)登革病毒通用探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 50次
15-33500 Dermatophilus congolensis刚果嗜皮菌探针法荧光定量PCR试剂盒 50次
15-57700 Dhori Virus多里病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 50次
15-16000 Dichelobacter nodosus节瘤拟杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 50次
15-87000 Dirofilaria immitis犬恶丝虫探针法荧光定量PCR试剂盒 50次
15-65700 Dobrava-Belgrade Virus 贝尔格莱德病毒型探针法荧光定量PCR试剂盒 50次
15-44200 Duck Hepatitis B Virus(DHBV)鸭乙型肝炎病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 50次
15-36410 Duck Hepatitis Virus(DHV)鸭肝炎病毒1型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 50次
15-36420 Duck Hepatitis Virus(DHV)鸭肝炎病毒2型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 50次
15-36430 Duck Hepatitis Virus(DHV)鸭肝炎病毒3型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 50次
15-36400 Duck Hepatitis Virus(DHV)鸭肝炎病毒通用探针法荧光定量PCR试剂盒 50次
15-36600 Duck Plague Virus(DPV)鸭瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 50次
15-57400 Eastern Equine Encephalomyelitis Virus(EEEV )东部马脑脊髓炎病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 50次
15-30000 Ebola Virus(EBOV)埃博拉病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 50次
15-59000 Echinococcus granulosus细粒棘球绦虫探针法荧光定量PCR试剂盒 50次
15-61400 ECHO Virus埃可病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 50次
15-14610 Edwardsiella ictaluri鮰爱德华氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒 50次
15-14600 Edwardsiella spp.爱德华氏菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒 50次
15-14620 Edwardsiella tarda迟钝爱德华菌探针法荧光定量PCR试剂盒 50次
15-72400 Egg Drop Syndrome Virus-1976(EDSV-76)鸡减蛋综合征病毒-1976探针法荧光定量PCR试剂盒 50次
15-53100 Egtved Virus(同VHSV)艾特韦病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 50次
15-54300 Ehrlichia chaffeensis查菲埃立克体探针法荧光定量PCR试剂盒 50次
15-31000 Ehrlichiae spp.埃立克体属通用探针法荧光定量PCR试剂盒 50次
15-83400 Eikenella corrodens啮蚀艾肯菌探针法荧光定量PCR试剂盒 50次
15-49900 Eimeria spp.艾美耳球虫属通用探针法荧光定量PCR试剂盒 50次
15-20100 Emmonsia parva伊蒙微小菌探针法荧光定量PCR试剂盒 50次