找不到产品?留下需求帮您找
一键询价赛多利斯 Microsart ATMP DNA提取试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart AMP DNA提取试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart Research 细菌检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart ATMP 细菌检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart Research 支原体检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart® ATMP 支原体检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart 支原体验证标准品(菌株标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart 支原体校准试剂(DNA标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart® 细菌验证标准品(菌株标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart 细菌校准试剂(DNA标准品)
赛多利斯 | 一周
面议
中文名称:染料法荧光定量PCR试剂盒
英文名称:Fusarium moniliformeV
运输:低温运输
保存:-20℃保存
有效期:一年
货期:现货
产品介绍:聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR),是体外酶促合成特异DNA片段的一种经典方法,由变性、退火及适温延伸组成,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点,是分子生物学实验的最基本实验技术。
如何选择染料法荧光定量PCR试剂盒:RT-PCR是指将RNA 的反转录(RT)和cDNA 的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。利用逆转录酶将RNA逆转录(RT)成cDNA(Complementary DNA),再以cDNA 为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR的常见应用包括基因检测、转录物变异检测,以及克隆和测序用cDNA模板制备。
PCR反应鉴定——PCR反应条件
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
变性 | 94℃ | 10 sec |
30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
注:
a)退火温度:请参考引物的理论 Tm 值,退火温度可设置低于引物理论值 2-5℃。
b)延伸时间:需要根据片段的长度来确定,对于1 kb以内的DNA片段,建议延长时间为30 sec。
染料法荧光定量PCR试剂盒常见问题与解决方法:
常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
阳性对照、待测样本均无条带。 | PCR反应体系或反应条件不合适。 | 使用梯度PCR摸索PCR反应条件。 |
PCR试剂保存不当失去活性。 | 2× PCR Mix应保存于-20℃,使用时避免反复冻融。若使用频繁,可在4℃短时间存放。 | |
引物设计问题。 | 尝试重新设计引物进行检查。 | |
阳性对照有目的条带,待测样本无条带或条带弱。 | 不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。 | 使用新鲜的试剂。 |
加入组织裂解液过量。 | 增大反应体系,或减少裂解液的用量。 | |
样本裂解混合液保存不当或保存时间过久,DNA基因组已经降解。 | 裂解混合液液可在4℃保存2-3天,尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。 | |
模板加入量不适合。 | 在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时,可以降模板浓度调节到低于10%的范围。 | |
PCR循环数不足。 | 适当增加PCR的循环数,推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂,一般PCR反应要比用纯化的 DNA模板多5-10个循环为佳。 | |
非特异性扩增 | PCR退火温度太低,循环数、引物浓度或模板浓度太高。 | 增加PCR退火温度,降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。 |
PCR引物错配。 | 重新设计PCR引物。 | |
配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 | PCR反应体系的配制在低温下进行,配制完成后尽快进行PCR扩增反应。 | |
阴性对照出现目的条带 | 操作工具或试剂污染。 | 实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。 |
样本间交叉污染。 | 每个取样器只对一个样本使用;或取完一个样本后,将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中,反复涮洗,然后用干净的纸巾擦干残液。 |
注意事项
1. 建议使用新鲜采取的动物组织,若为长期冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响PCR效率。
2. 试剂Buffer AL若低温保存,易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间,也可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀,混匀后再使用。
3. 电泳检测时,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则,电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带,影响实验结果。
4. 建议扩增片段长度1 kb以内,以便扩增效率佳。
5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
染料法荧光定量PCR试剂盒运输与保存方式
冰袋运输。-20℃避光储存,有效期一年。本品避免反复冻融。建议分装保存。
相关PCR列表:
13-80200 Merkel Cell Polyomavirus(MCPyV)梅克尔多元癌细胞病毒PCR试剂盒 50次
13-48300 Meta肺炎病毒RT-PCR试剂盒 50次
13-22400 Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus( MRSA)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PCR试剂盒 50次
13-26010 Microsporum canis 犬小孢子菌PCR试剂盒 50次
13-26020 Microsporum gypseum石膏样小孢子菌PCR试剂盒 50次
13-26000 Microsporum spp.小孢子菌属通用PCR试剂盒 50次
13-80300 Middelburg Virus米德尔堡病毒RT-PCR试剂盒 50次
13-36900 Middle East Respiratory Syndrome-Coronavirus(MERS-CoV)中东呼吸综合征冠状病毒RT-PCR试剂盒 50次
13-78100 Mikrocytos mackini马可尼小囊虫PCR试剂盒 50次
13-11000 Milker's Nodule Virus(MNV)挤奶工结节病毒PCR试剂盒 50次
13-57800 Mima polymorpha多态小小菌PCR试剂盒 50次
13-34200 Mink Enteritis Virus(MEV)水貂病毒性肠炎病毒PCR试剂盒 50次
13-80800 Mobala Virus(MOBV)莫巴拉病毒RT-PCR试剂盒 50次
13-55600 Molluscum Contagiosun Virus(MCV)传染性软疣病毒PCR试剂盒 50次
13-13600 Monkey Pox Virus(MPV)猴痘病毒PCR试剂盒 50次
13-81000 Mopeia Virus(MOPV)莫佩亚病毒RT-PCR试剂盒 50次
13-80910 Moraxella catarrhalis 卡他莫拉菌PCR试剂盒 50次
13-80900 Moraxella spp.莫拉氏菌属通用PCR试剂盒 50次
13-80700 Morganella morganii摩氏摩根菌PCR试剂盒 50次
13-54100 Mouse Hepatitis Virus(MHV)小鼠肝炎病毒RT-PCR试剂盒 50次
13-54000 Mouse Leukemia Virus(MLV)小鼠白血病病毒RT-PCR试剂盒 50次
13-50500 Mouse Mammary Tumor Virus(MMTV)小鼠乳腺瘤病毒RT-PCR试剂盒 50次
13-91000 Mouse Pox Virus(MPV)鼠痘病毒PCR试剂盒 50次
13-80000 Mucor spp.毛霉属通用PCR试剂盒 50次
13-26100 Mud Crab Dicistrovirus (MCDV)青蟹双顺反子病毒PCR试剂盒 50次
13-32500 Mumps Virus(MV)腮腺炎病毒RT-PCR试剂盒 50次
13-48400 Murcambo病毒RT-PCR试剂盒 50次
13-81100 Murray Valley Encephalitis Virus(MVEV)墨累谷脑炎病毒RT-PCR试剂盒 50次
13-41400 Muscovy Duck Parvovirus(MDPV)番鸭细小病毒PCR试剂盒 50次