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获取电话Ar.Qual感受态细胞
Ar.Qual Chemically Competent Cell 产品说明书
产品规格 （CAT#: LM1060）
Ar.Qual： 100μl/支
pCAMBIA2301（control vector，10ng/μl ) 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（12个月）
Ar.Qual感受态细胞基因型
Agrobacterium rhizogenes (strR,CamR ) Ar Qual Ri (agropine type)
Ar.Qual感受态细胞产品说明
发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大 多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.Qual发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒，具有 广泛的宿主范围（玉米，烟草，番茄，柑橘等），同时具有链霉素，氯霉素抗性。本公司生产的Ar.Qual化学 转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒（卡那霉素抗性）检测，转化效率>104 cfu/μg DNA。
Ar.Qual感受态细胞常规操作方法
1.取-80℃保存的Ar qual发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2.每100μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量）
，用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、
冰浴5分钟。
3. 冰浴中拿出放室温，加入700μl 无抗生素的TY液体培养基，于28℃振荡培养2小时。
4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY平板上，
倒置放于28℃培养箱培养2-3 天
● 农杆菌相关抗生素配方： 抗生素 配方 原液 工作液 羧苄青霉素 (carb) 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 50 mg/ml 50 μg/ml 硫酸卡那霉素(kan) 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 50 mg/ml 50 μg/ml 链霉素 (strep) 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 10 mg/ml 50 μg/ml 利福平 (rif) DMSO溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 10 mg/ml 20 μg/ml 庆大霉素 (gent) 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 20 mg/ml 40 μg/ml 氯霉素（cam） 无水乙醇溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 34 mg/ml 34 ug/ml 常用农杆菌抗性： (R：抗；S：敏感。)
农杆菌菌株 | 羧苄青霉素(carb) | 链霉素(strep) | 利福平(rif) | 氯霉素(gent) | 硫酸卡那霉素(kan) |
Ar.A4 | S | S | S | S | R |
MSU440 | S | R | S | S | S |
Ar.Qual | S | R | S | R | S |
C58C1 | S | R | R | S | S |
ATCC15834 | S | S | S | S | S |
K599 | S | R | S | S | S |
Ar.1193 | R | R | R | S | S |
● TY配方（1L）：
Tryptone 5g
Yeast extract 3g
补水到1L体积，完全溶解后，121度、20分钟高温灭菌
配制1M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌
每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。
若配制TY固体培养基，则加入15g 琼脂粉。
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转
化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，
与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获
得大的菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。
4. Ar.Qual具有链霉素、氯霉素抗性，不可用于具有链霉素抗性或氯霉素抗性质粒的转化。
同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？
答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？
答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。
