上海远慕生物详细为您介绍SP-琼脂糖凝胶FF实验方法,操作流程,注意事项,用途,规格,适用范围等咨讯,本司专业销售ELISA试剂盒,细胞株,酶类,表面活性剂,动物血清血浆,标准品对照品,有机试剂,无机试剂,生化试剂,生物试剂,化学试剂,标准物质,维生素,抗生素,培养基,抗体,抗原,溶液,实验耗材,细胞培养,其他实验试剂等,本司的试剂分为进口试剂,国产试剂,欢迎订购!
中文名:SP-琼脂糖凝胶FF
英文名:SP Sepharose FF
供应商:上海远慕
规格:100ml,500ml
基质:6%琼脂糖微球
离子交换类型:强酸性阳离子基团
SP-琼脂糖凝胶FF实验方法:
1.乙醇浸泡:在室温下,将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干;
2.无盐水浸泡:室温下,在无盐水中充分溶胀24小时,间隙搅拌,以保证凝胶的完全溶胀,然后;
3.盐酸浸泡:在常温下再用0.2NHCl浸泡12小时,间隙搅拌,滤干,水洗只中性;
4.将溶胀好的凝胶脱气后(真空抽滤或超声波)根据装柱要求一次性置入柱内,注意保持湿态装柱,并避免柱内产生气泡或断层;
5.上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);
6.凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1-2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积,柱高的选择也与分离要求相关,柱高控制在40-50cm以下,过高的凝胶层会引起较大的反压,应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制,脱盐时高径比为5:1即可;
7.洗脱方法:可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化;
8.在位清洗(CIP)凝胶使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积,再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。
SP-琼脂糖凝胶FF产品简介:
SP-琼脂糖凝胶FF是一种将羧甲基键合在琼脂糖微球上形成的带有强酸阳离子基团的层析分离介质。该产品保留了琼脂糖极好的亲水性及大网架结构,与生物活性大分子有很好的相容性,具有离子交换容量高、非特异性吸附少、流速快等特点,广泛用于蛋白质、核酸、多肽及多糖等生物大分子的实验室规模制备和生物制药、生物工程的工业化制备。
SP-琼脂糖凝胶FF实验流程:
1.平衡 : 用2~5个柱体积的初始缓冲溶液进行平衡,建议流速为100 cm/h。
观察检测器的变化,直到电导率、pH值等参数不变。
2.上样 : 样品的预处理:样品需用0.45μm滤膜过滤,在上样,以免堵塞层析柱。
上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择,也可通过线性实验找到最佳上样量。
3.淋洗 : 用2~3个柱体积的平衡缓冲液进行淋洗,观察检测器的变化,直到电导率、pH值等参数基本不变。
4.洗脱 : 可用恒定洗脱、梯度洗脱或者阶跃洗脱。一般推荐使用增大盐浓度的梯度洗脱。
SP-琼脂糖凝胶FF注意事项:
1.使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,影响纯化效果。
2.在常用水相缓冲液、1M NaOH、8M 尿素、6M 盐酸胍、70%乙醇中稳定。
3.本产品保存条件为20%乙醇,4~8℃。
4.2-25℃,常压,避光运输。
5.仅供科研实验使用。
6.操作过程中,请配带手套等保护设备。
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