上海远慕生物详细为您提供粪便RNA提取试剂盒说明书,注意事项,操作步骤,保存条件,用途等资讯,本司作为美国Omega品牌代理商,携手Omega共同推出更有质量保证的相关试剂,Omega旗下产品包含有:96孔板HP总RNA提取试剂盒,96孔板石蜡包埋组织RNA提取试剂盒,磁珠植物RNA提取试剂盒,磁珠组织RNA提取试剂盒,RNA保护液,SQ DNA RNA 蛋白质共提取试剂盒,RNA室温保护液,Taq DNA Polymerase,琼脂糖凝胶回收试剂盒,其他系列等,欢迎来电了解更多有关Omega产品详情!
名称:粪便RNA提取试剂盒
品牌:Omega
供应商:上海远慕
货号/型号:R6828-00/Stool RNA Kit(5)
货号/型号:R6828-01/Stool RNA Kit(50)
货号/型号:R6828-02/Stool RNA Kit(200)
用途:从05g粪便样品中提取高质量的RNA
储存、运输和有效期:常温运输,室温(15-25℃)保存,有效期为12个月,消化液请于-20℃存放,避免反复冻融,裂解液Ⅰ请于4℃存放。
粪便RNA提取试剂盒说明书操作步骤:
请自行准备:无水乙醇、PBS、1.5mL离心管。
取出析出液和洗涤液,按以下操作:
a) 析出液:4.5mL加入25.5mL无水乙醇;9mL加入51mL无水乙醇。
b) 洗涤液:9mL加入21mL无水乙醇;18mL加入42mL无水乙醇。
c) 配制好的析出液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。
取200mg的粪便于试管中(若粪便样本为液态,取200μL于试管中),加入2mL PBS充分振荡混匀,300g离心5分钟,收集上清;取收集的上清液1mL于1.5mL离心管中,12000 rpm离心5分钟,弃上清后沉淀用1mL PBS重悬,振荡混匀后,12000 rpm离心5分钟,收集沉淀。
加入200μL裂解液Ⅰ,悬浮沉淀,37℃放置30分钟。
加入200 μL 裂解液Ⅱ,20μL消化液,充分振荡混匀,56℃水浴10 分钟。
加入600μL析出液,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响RNA的提取与后续实验。
将吸附柱放入收集管内,取上述溶液600μL转入吸附柱内,静置2 分钟,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。
将剩余400μL液体转入上述吸附柱内,重复操作步骤7。
将吸附柱放回收集管内,加500μL洗涤液至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。
将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4℃离心2 分钟,离去残留的洗涤液。
取出吸附柱,放入新的1.5 mL 离心管内,加入30-100 μL洗脱液,静置3分钟,12,000 rpm 4℃ 离心2分钟,收集RNA溶液。提取的RNA-70℃保存,或直接用于下一步实验。
粪便RNA提取试剂盒注意事项:
1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。
3.结合液CB 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA, 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱, 但应该确保pH大于7.5, pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl, 1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
5.PCR可能被过量的DNA(一般大于1μg)抑制,使用最小用量的洗脱DNA(适当稀释)反而可以得到更好的扩增。一般加入的洗脱DNA体积不要超过总PCR反应体积的10%。我们建议在PCR反应体系中加入终浓度0.1 μg/μl的BSA(牛血清白蛋白)有助于得到最佳扩增效果。
注:采用了最新的离子膜技术并反复优化了裂解液和洗脱液配方,提取得到的RNA纯度更高,最大限度地去除了蛋白、色素、脂类、杂质污染,可以直接应用于Northern 杂交、RT-PCR、Real Time RT-PCR、 cDNA 文库构建、体外翻译等各种常规分子生物学实验。
粪便RNA提取试剂盒部分相关产品如下:
土壤RNA中量提取试剂盒
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