黄绿青霉操作前打开紫外灯30-60分钟,这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果,但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置,可以与紫外灯一起打开,黄绿青霉此时不需要抽滤开的过大就可以。(所谓的抽滤装置就是就是那个风机,就是吹风超净工作台,不是过滤培养液的)!
细胞传代培养(消化法)具体操作:
一:传代前准备;
1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械:保证足够的*作空间,不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微波炉内高火,8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液:黄绿青霉取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。
二:胰蛋白酶消化;
1.加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。
2. 黄绿青霉 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。
3.吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。
三:吹打分散细胞;
1.吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
2.吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。
3.平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8分钟。
4.弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
四:分装稀释细胞;
1.分装:将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。
2.显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。
五:继续培养;
用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。黄绿青霉传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25%时为一个+,占50%为++,占75%时为+++。
XY0440 人支气管上皮细胞,BEAS-2B细胞
XY0441 人支气管上皮细胞,16HBE细胞,
XY0442 人正常乳腺细胞,MDA-kb2细胞
XY0443 人正常乳腺上皮细胞,MCF-10A细胞,
XY0444 人正常乳腺上皮细胞,human MCF10A细胞
XY0445 人正常前列腺上皮细胞,RWPE-2细胞
XY0446 人正常前列腺上皮细胞,RWPE-1细胞
XY0447 人正常前列腺基质永生化细胞,WPMY-1细胞
XY0448 人正常皮肤细胞,Hacat细胞,
XY0449 人正常肝细胞,LO2细胞,
XY0450 人正常肝细胞,human QSG-7701细胞
XY0451 人正常肝细胞,human L02细胞
XY0452 人正常肝细胞,HL-7702细胞
XY0453 人整合SV40基因的乳腺上皮细胞,HBL-100细胞
XY0454 人张氏肝细胞,Chang liver细胞,
XY0455 人原位胰腺腺癌细胞,BxPC-3细胞,
XY0456 人原位胰腺腺癌细胞,BxPc-3-EGFP-puro细胞
XY0457 人原髓细胞白血病细胞,HL-60细胞
XY0458 人原髓细胞白血病细胞,AL7P/HL-60R细胞
XY0459 人原胚肾转化细胞系 293 Ad5+细胞
XY0460 人原巨核细胞型白血病细胞,UT-7细胞
XY0461 人永生化表皮细胞,HaCaT细胞
XY0462 人永生化鼻咽上皮细胞系 NP69细胞,
XY0463 人胰腺腺泡上皮癌 HPAC细胞
XY0464 人胰腺腺癌细胞,Panc 10.05细胞
XY0465 人胰腺细胞,AR42J细胞
XY0466 人胰腺导管腺癌细胞,PL45细胞
XY0467 人胰腺癌细胞系 SW 1990细胞
XY0468 人胰腺癌细胞,SFPAC-1细胞
XY0469 人胰腺癌细胞,PSN1细胞
XY0470 人胰腺癌细胞,PC-3细胞
XY0471 人胰腺癌细胞,PC-2细胞